診斷試劑
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診斷試劑范文第1篇
作為專業名詞，“體外診斷試劑”可能有很多人都不能準確說出它的定義，但是，如果說到獻血時需要做的各項檢查，包括艾滋病、乙肝檢測等，或許大家就不會陌生了。北京萬泰生物藥業股份有限公司（以下簡稱萬泰藥業）就是這樣一家從事體外診斷試劑和基因工程疫苗研發、生產和銷售的創新型企業。
“體外免疫診斷試劑是用于疾病診斷檢查的一類醫學試劑，這類試劑主要通過血液等作為檢查對象，檢測其中的病毒或抗體，以作為診斷疾病的一種手段”。據萬泰藥業總經理邱子欣介紹，通過21年的不懈努力，萬泰藥業從設立之初的小規模實驗室已經發展到年銷售額超過4億元的生物制藥高新技術企業，并成為國內最大的輸血安全診斷產品提供商和亞太地區最大的艾滋病診斷試劑生產基地。
立足，源于把握市場需求
據統計，自2003年起，萬泰藥業的艾滋病診斷試劑已連續9年全國市場占有率第一，擁有超過30%的市場份額。
他們的艾滋病第三代診斷試劑在2001年獲國家科技進步二等獎，同時被列為年度國家重點新產品和北京市重大科技成果轉化項目；也是中國性病艾滋病防治協會唯一推薦使用產品，衛生部艾滋病哨點監測指定使用試劑。
如今在艾滋病診斷試劑上風光無限的萬泰藥業，其實也是從“苦日子”里熬出來的。
上世紀90年代中期，萬泰藥業正處于起步階段，盡管在1995年，他們就做出了國內第一個艾滋病的檢測試劑盒，但日子依然過得緊巴巴。
與此同時，我國第三代艾滋病診斷試劑依賴進口，國產試劑還停留在第二代的水平。艾滋病抗體試劑研發升級的關鍵原料艾滋病重組抗原，長期以來完全依賴進口，導致我國艾滋病診斷試劑在靈敏度和特異度方面始終與國際主流試劑有相當大的差距。
伴隨著國家對艾滋病診斷愈加重視，尤其是1995年開始，國家要求獻血時必須對捐獻者做艾滋病檢測，艾滋病診斷試劑的市場需求被打開。
國內艾滋病診斷試劑在技術上升級換代的迫切需求和應用市場的巨大機遇都為國內企業留下了廣闊的發展空間。誰能搶占先機，誰就有可能在激烈的市場競爭中脫穎而出。
“我們很幸運，企業的發展正好與國家相關產業發展同步”，邱子欣嘴里說的“幸運”，換句話講，就是機會只眷顧有準備的人。
1999年，萬泰藥業和廈門大學科研人員共同研制出國內唯一一個能完全滿足艾滋病毒抗體診斷試劑盒生產要求的艾滋病毒重組抗原，填補了國內的空白。
此后，雙方研制出了國內第一個第三代艾滋病毒抗體診斷試劑盒，質量與國際一流產品水平一致，與國產第二代產品相比，在靈敏度和特異性上實現了質的飛躍，結束了外國公司對國內市場的壟斷。同時，萬泰藥業將科研成果迅速轉讓給占我國艾滋病診斷試劑市場75%以上的10余個主要診斷試劑廠商和臨床單位，使國產艾滋病毒診斷試劑盒在2001年實現全面更新換代。
但是在征服艾滋病的道路上沒有止境，萬泰藥業于2008年推出國內首家上市的國產HIV第四代診斷試劑，進一步提升了我國的艾滋病診斷能力，使國產試劑達到國際領先水平。在2011年度全國艾滋病抗體診斷試劑臨床質量評估工作中，萬泰藥業的艾滋病抗原抗體診斷試劑敏感性、特異性、功效率均為100%；產品性能均位居同類參評試劑榜首。
在艾滋病感染監測領域，由于我國現有的各種艾滋病診斷試劑均針對血液標本，需要進行侵襲性采樣，難以滿足人群監測的需求，這也是目前我國艾滋病報告感染人數遠遠低于實際感染人數的主要原因之一，而對各種高危人群以及正常人群進行艾滋病感染的密切監測和進行自愿咨詢檢測已成為我國艾滋病防治的最重要工作之一。
2009年春天，全球“甲流”爆發，我國科研人員立即研發“甲流”的快速檢測試劑，當時主要是對患者的鼻腔分泌物和咽拭子進行快速檢測。
用相同的原理，可不可以將這一技術應用于艾滋病的快速檢驗？正是這份靈感，才有了2011年萬泰藥業的艾滋病唾液檢測試劑。
人體感染艾滋病后，一般需要一段時間才會產生抗體，1～2個月左右血液中才可檢測到，這段時間就叫窗口期，但窗口期同樣具有傳染性。艾滋病的窗口期漏檢是一個全球性難題，萬泰藥業的唾液檢測試劑的橫空出世有效縮短了窗口期的漏檢時間。
這種艾滋病唾液檢測試劑，由于采用先進的免疫滲濾法，操作簡便、無痛，30分鐘內即可觀察檢測結果，不會對受試者造成針刺損傷，不容易發生職業暴露，大大提高了樣品的易獲得性和使用的方便性，同時極大降低被檢測者和醫護人員受感染的風險。
2012年，萬泰又推出了國內首個RIBA法的的艾滋病確證試劑，縮短了確證試驗的窗口期，性能達到國外試劑的先進水平。
過硬的產品質量和優質的售后服務樹立了萬泰公司良好的品牌形象，贏得了客戶的廣泛認可。目前，以艾滋病診斷試劑為龍頭，萬泰藥業的丙肝、戊肝等多種體外免疫診斷試劑都相繼占據了國內行業的領先地位，公司的銷售額從1997年的不足100萬元，發展到2011年銷售額3.4億元。“2012年，我們的銷售額有望達到4.5億元，最近10余年，公司年平均復合增長率超過25%。”說到此處，邱子欣臉上滿是歡喜。
創新，就要先人一步
除了艾滋病診斷試劑的系列產品外，萬泰藥業在戊肝病毒診斷試劑、戊型肝炎疫苗和宮頸癌疫苗等多個國家一類創新藥物上取得了重大突破和豐碩的成果。
在外行看來，不論是早期的艾滋病診斷試劑，還是如今的戊肝疫苗，萬泰藥業的產品研發路線似乎總是劍走偏鋒，在尋找冷門。
“這可能是一種誤解，其實在國內的免疫診斷領域，我們很多產品也屬于大眾產品。比如丙肝病毒診斷試劑、乙肝病毒全套診斷試劑、甲型流感、EV71型手足口病等用于血站和醫院臨床的酶免及金標法快速診斷試劑，以及臨床生化系列診斷試劑，都是比較領先的。”邱子欣認為，之所以有所謂的“冷門”，并不是他們刻意去尋求的研究突破點，而是萬泰人在免疫診斷領域多年的深入研究后，發現了一些與其已有研究相關但尚未開展起來的領域。而他們憑借深厚的研發功底，較早地在這些陌生領域中取得驕人成績，讓別人有了這樣的錯覺。
“萬泰藥業一貫的發展，告訴我們，只有先在某一領域做‘深’，才能有日后做‘寬’產品線的基礎，才能爆冷。所以，我們并不是只做冷門，但做冷門的東西，有可能做到世界第一的。”盡管不認同“萬泰藥業=冷門專業戶”的看法，但是在邱子欣的眼中，創新確實需要先人一步，在別人還沒有注意時，就要做起來。而萬泰藥業研發的全球首個戊肝疫苗恰恰印證了這個觀點。
2012年1月11日，由廈門大學和萬泰藥業聯合研制的“重組戊型肝炎疫苗（大腸埃希菌）”已獲得國家一類新藥證書和生產文號，成為世界上第一個用于預防戊型肝炎的疫苗。重組戊肝疫苗是迄今唯一使用大腸桿菌表達系統研制的病毒疫苗，它的成功研制扭轉了國際醫藥界中“原核系統不能用于病毒疫苗研制”的傳統認識。
戊肝是由戊肝病毒感染所致的急性病毒性肝炎。
一般而言，由病毒引起的肝炎目前可分為甲型、乙型、丙型、丁型和戊型5種。其中，戊肝發現最晚，在1989年之前，它一直被稱作非甲非乙型肝炎。
戊肝病毒是人類了解最少，也是最復雜的致病病毒之一。在目前已經發現的至少4種基因型戊肝病毒中，1型和2型主要感染人類，3型和4型則是人畜共患病毒。
“到目前為止，公眾對戊肝了解不多，事實上，戊肝流行率低于甲肝，但危害性更大，以豬作為主要宿主的戊肝病毒，與人們日常生活聯系緊密。其死亡率約為1%～3%，孕婦病死率可高達20%，目前尚無有效治療手段，而疫苗是預防戊肝的最有效手段。”據邱子欣介紹，早在14年前，萬泰藥業就在對其他肝炎的研究中，對戊型肝炎有了初步了解，并意識到了它的危害性。
從1998年起，每年萬泰藥業把診斷產品的部分利潤投入戊肝疫苗的研發，經過14年艱辛研發，累計投入資金5億元，憑著鍥而不舍的精神取得了疫苗的研發成功。
“我們的戊肝疫苗采用的是基因工程技術。”邱子欣告訴記者，與傳統滅活疫苗和減毒活疫苗比較，基因工程疫苗的研發不依賴于病原體的培養，因此對于大量尚未建立成熟體外培養技術的病原體也能進行疫苗的研制。在生產過程中，基因工程疫苗完全不涉及病原體，消除了由于病原體滅活不徹底或減毒不完全導致的安全性問題。不僅如此，基因工程疫苗的研發還可通過精心設計的純化過程實現對生產過程中伴隨的各類雜質的高效清除和殘余成分的高度可控，降低了由于雜質導致的各類接種副反應的風險，提高了疫苗的安全性和耐受性，同時還能提高不同疫苗生產批次間的均一性。
萬泰藥業的戊肝疫苗是國內少有的具有原始創新型的新型疫苗，它的成功讓很多疫苗企業看到了自主創新模式的希望，無疑將會給中國疫苗市場帶來巨大震動。
業內人士表示，戊肝疫苗的成功上市能為中國企業擺脫現有仿制模式的助推器，增強中國市場的信心，加大自主創新投入，投身于更多創新型疫苗的研發中。這對加快我國疫苗行業轉型，促進疫苗產業總體水平的提高十分有利。
近年來我國戊肝發病率逐年上升，已在成人急性肝炎中位居首位。衛生部網站的數據顯示，2011年戊肝發病人數已和甲肝非常接近，但死亡人數遠遠超過甲肝。這種戊肝疫苗的成功上市必將成為人們的健康福音。
實力，來自科企長期互信
作為國家生物高技術產業化示范工程基地，近年來萬泰藥業的高速成長不是偶然的。
可以說，萬泰藥業對科研攻關的高度重視和對技術研發的長期投入為其持續發展不竭的能量與動力，形成了基于基礎研究與產業化實踐的自主創新模式。其中，萬泰藥業和廈門大學10多年的持續合作，為萬泰藥業平添了強大的技術后盾。
如前述的艾滋病抗原及診斷試劑、戊肝疫苗和重組人瘤病毒疫苗（預防宮頸癌和尖銳濕疣）等重大醫藥領域產品及項目，都是在雙方同心協力下結出的碩果。
1993年，來北京辦事的邱子欣結識了在京進修的廈門大學教授夏寧邵。當時，對艾滋病診斷研究抱有同樣興趣的兩人，可能不曾想到，以后兩人的合作會一直延續至今，并從個人的志同道合轉變為兩個單位的密切合作。
1997年，當邱子欣來到萬泰藥業后，將已經找到艾滋病抗原的夏寧邵實驗室，推薦給公司，雙方志趣相投，一拍即合。
“都是窮出身，底子都很薄，我沒有多少錢給你，你的東西一開始也不見得多好。怎么辦呢？大家不斷磨合，越磨越好。就我們的經驗而言，產學研合作中，最好不要給對方提太多的要求，關鍵是足夠的信任，才能使合作持續下去。”邱子欣半開玩笑地道出了合作初期雙方的境遇。
萬泰藥業2001年加盟養生堂有限公司，成為養生堂涉足制藥領域的重要支柱。養生堂公司也進一步加大了對夏寧邵實驗室的投入，萬泰藥業與廈門大學之間就形成了一個產研轉化鏈條。
“自1997年到2007年，公司的銷售收入增長了71倍。廈大與萬泰合作的實驗室也成長為國家傳染病診斷試劑與疫苗工程技術研究中心。目前，中心年科研經費達到3000萬元，科研人員隊伍也壯大到180多人。萬泰與廈大堪稱產學研成功合作的典范。”邱子欣稱，現在的研究機構很多，研究成果也很多，但怎樣把成果轉化為市場所接受的產品，萬泰有自己的獨到之處。
邱子欣說：“雙方已經有了良性的互動。現在的合作并不是說誰給誰投資，而是互相離不開了。他的東西沒有我來做產業化，他不放心。沒有他的技術，我也沒有好產品。所以變成一種互相需求。我們所有合作，都不存在技術買斷的形式。我們都很反對買斷，因為產品的改進是無止境的，在合作過程中誰也離不開誰。項目技術過來之后，在市場銷售過程中還需要改進，這時候雙方還是離不開。”
好的產品贏得市場，但利益如何分配呢？這樣的問題，往往在實際操作中困擾著科企合作的穩定關系。同樣的問題，在邱子欣看來，產學研合作很大的一個問題就是雙方沒有信任。“我一旦給你東西了，你就把我甩掉了，甩掉了我的好處就不夠多了，企業外的科研機構很擔心這個。而企業擔心的是，我花一大筆錢去買，這個東西是不是足夠有價值？我們跟廈大合作為什么能夠成功呢？大家把這些拋開，一起來耐心地做產品。”
正如邱子欣所說，除了充分相信對方，在醫藥產業中搞產學研結合，需要足夠的堅韌。眾所周知，藥品從研發到生產的周期比較長，不像IT、房地產那么快，而且審批非常慢。夸張的說，合作雙方對項目的進展可能會看不到頭，難免會互相埋怨，情緒會慢慢出來，所以倒過來講還是信任。“如果要投（資）醫藥或生物技術項目，就要有足夠的耐心，否則你就去投房地產、投IT。”
據了解，多年的合作，萬泰藥業和廈門大學在成果轉化方面已經有了相當豐富的經驗，萬泰藥業專門配備了100多位科研人員與該實驗室對接，專門研究成果的轉化問題。“即便這樣，人手仍然緊張。”邱子欣表示。
診斷試劑范文第2篇
【關鍵詞】Binax Now 瘧疾快速診斷試劑卡瘧疾檢測效果
【中國分類號】R531.3 【文獻標識碼】A 【文章編號】1004-7484(2010)08-00-02
Binax Now malaria rapid diagnostic reagents card detect malaria impact evaluation
【Abstract】ObjectiveTo evaluate the Binax Now Malaria rapid diagnostic reagent card for clinical testing in patients with malaria is malaria results, for future applications at the grassroots level to carry out on-site basis.MethodsThe etiology of microscopic examination results or effects of drug treatment, based on determined evaluation Binax Now Malaria rapid diagnostic reagent for detecting malaria card sensitivity and specificity. ResultsThe clinical "Four hot" patients to evaluate Binax NowMalaria rapid diagnostic reagents card and pathology 2 methods examined 53 cases, 24 cases were positive, negative 25 cases, sensitivity of 100% (24/24) specificity of 86.21% (25/29), both consistent with the rate 92.46%(49/53), a single display Binax Now Malaria rapid diagnostic reagent card positive in 4 cases. But have not done in 15 cases of pathogen detection, Binax NowMalaria rapid diagnostic reagent card positive in 5 cases, a single display Binax Now Malaria rapid diagnostic reagent card positive in 9 cases, after chloroquine phosphate tablets / Peter chloroquine phosphate tablets drug or combination of Artemisia Ether effective treatment or cure, confirmed that the other non-falciparum malaria or Plasmodium falciparum malaria. ConclusionThe Binax Nowmalaria diagnosis malaria positive patients are sensitive (100%), compared with the etiology microscopy, Binax Now Malaria rapid diagnostic reagent card fast, simple, reliable, sensitive and specific high, for at the grassroots level to promote the use.
【Key words】Binax Nowmalaria rapid diagnostic reagents, Malaria Testing results
瘧疾是嚴重危害人類健康的傳染性寄生蟲病,及時診斷和及時治療是WHO推薦的首要瘧疾控制策略。以往確診靠制厚薄血片在顯微鏡下鏡檢,需要好的儀器和鏡檢人員技術嫻熟,隨著瘧疾基本消滅,以往技術嫻熟鏡檢人員大批退休,年輕鏡檢人員見瘧原蟲機會少,給診斷帶來了困難。但隨著快速診斷實驗(RDT)技術發展,瘧疾快速診斷試劑被推薦在瘧疾防治中使用。四川省疾病預防控制中心為解決基層瘧疾診斷技術,2007年8月―2009年為我區疾病預防控制中心提供了美國INvweness Medical Innovation公司生產:Binax Now瘧疾快速診斷試劑卡,通過兩年多現場應用實驗,取得了滿意的效果,現將觀察結果報告如下:
1 材料與方法
1.1 材料
Binax Now瘧疾快速診斷試劑卡系美國Invweness Medical Innovation研發生產,為雙蟲卡,可同時檢測3種人瘧原蟲(間日瘧原蟲、卵形瘧原蟲、三日瘧原蟲)和惡性瘧原蟲。在有效期內使用,常溫下保存。
1.2 檢測對象
由各醫療機構推薦的臨床“四熱”病人考慮是瘧疾患者和到過云南、貴州、海南、緬甸和非州國家等發熱人員(T>37.5℃)為檢測對象。
1.3 方法
按Binax Now 瘧疾快速診斷試劑卡說明書進行操作。同時涂制厚薄血膜片2張,用吉氏染液染色15―20min后鏡檢瘧原蟲。實驗采用雙盲法,即在最終實驗結果確定前,鏡檢者與RDT檢測者互不知道結果。
2 結果
2.1 檢測基本情況
共使用Binax Now 試劑卡檢測69次,其中1次無效,即質控區(C)+測試區1(T1)+測試區2(T2)均無條帶顯色,測試無效率1.47%,表明該試劑卡質量及操作正確度均達到質控要求。共檢測發熱病人68例,其中男性40例,占58.82%,女性28例,占41.18%,年齡3―86歲。職業:主要以農民和外出務工人員為主。
2.2 檢測結果比較
Binax Now 試劑卡檢測68例,檢出陽性33例,其中接受Binax Now 瘧疾試劑卡和病原學2種檢測的53人,2種方法均為陽性24例,陰性25人。總體敏感性為100%(24/24),特異性為86.21%(25/29),總體符合率為92.46%(49/53),單一顯示Binax Now 試劑卡陽性4例,Binax Now 瘧疾試卡和病原學的陽性率分別為100%(28/28);85.72 %(24/28);實驗證明Binax Now 瘧疾試劑卡陽性檢出敏感性明顯高于病原學檢查,僅接受Binax Now 瘧疾試劑卡檢測的15人,陽性5例(見表1)。
2.3 Binax Now 試劑卡與患者治療效果的符合情況
對Binax Now 試劑卡檢測陽性(惡性瘧1例,非惡性瘧原蟲的其它瘧原蟲8例),患者采用蒿甲醚注射液、磷酸伯氨喹片組合藥治療的效果進行追蹤觀察,均治愈或有效(表2),表明均是瘧疾患者。
3 討論和分析
(1)美國INvweness Medical Innovation公司生產的瘧原蟲抗原檢測試劑盒(膠體金法)既可用于檢測瘧原蟲感染,也可以對惡性瘧原蟲感染做出鑒別診斷[1]。該試劑卡在泰國現場應用效果很好。
(2)本次現場實驗所使用Binax Now 瘧疾快速診斷試劑卡均在常溫下保存,使用中無效卡僅1次,無效率為1.47%。說明該試劑卡質量可靠[2]。
(3)病原學檢查受設備、染液、制片技術、鏡檢人員技術等因素的影響,且操作較繁瑣,費時和受條件限制。而Binax Now 瘧疾快速診斷試劑卡陽性敏感性和特異性高,且有簡便、快速、可靠等優點。
(4)通過兩年多的現場實驗,結果顯示,該試劑卡在臨床上用于瘧疾現癥患者的診斷明顯優于病原學方法。具有快速、簡便、準確、直觀以及不需要特殊儀器等優點,是目前適用于在基層推廣應用的一種快捷、實用性好檢測瘧疾的首選免疫學診斷方法。
參考文獻
[1]鄭香,湯林華,許永湘,等.快速免疫色譜測試卡診斷惡性瘧和間日瘧的效果評價[J].中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志,1999,17(4):235―236.
診斷試劑范文第3篇
（黑龍江省綏化市北林區動物檢疫站 152000）
1 材料與方法?
1.1 材料?
1.1.1 病料來源?
病料來源為綏化市某縣市中隨機選出的三個雞場中疑似大腸桿菌感染的 7日齡雞群中分別各取出 10只進行臨床診斷和實驗室診斷。?
1.1.2 培養基和試劑?
主要培養基和試劑有麥康凱瓊脂、伊紅美藍瓊脂、革蘭染液，普通肉湯培養基、普通瓊脂培養基、三糖鐵瓊脂、藥敏片、葡萄糖、麥芽糖、甘露醇、乳糖、蔗糖、枸櫞酸鹽及各類生化反應試劑、大腸埃希菌O型抗血清。?
1.1.3 儀器?
主要儀器有顯微鏡、試管、培養皿、吸管等。?
1.2 進行雛雞大腸桿菌實驗的方法?
分別對三個雞舍的雞群總數、發病數和死亡數作出統計。無菌采集病死雞的心、肝、脾、肺、腎等組織，將病料觸片和血液涂片，分別進行革蘭染色和堿性美藍染色、鏡檢。對A、B、C三個樣病例進行細菌分離培養和血清型鑒定。從三個樣中隨機挑取兩個總共組成6個 （a、b、c、d、e、f）紫黑色帶有金屬光澤的菌落接種到斜面培養基上，37℃恒溫培養18~24h。觀察細菌生長及菌落特征。?
1.2.1 動物回歸試驗?
將分離純培養的 6個病原菌菌液頸部皮下接種 30 只 7 日齡雛雞，每只 0.2mL（約2×108cfu）。并設10只為對照組，每只頸部皮下注射0.2mL滅菌肉湯。隔離飼養，觀察1 星期。?
1.2.2 藥敏試驗?
將斜面培養基中增菌純培養的菌株培養液均勻涂布于普通瓊脂培養基表面，37℃干燥8min。然后用滅菌鑷子取 10種抗生素藥物紙片，將其分別對稱地貼在培養基表面，每個平皿貼4種，37℃恒溫培養18~20h后觀察結果。使用的 10種藥物為呋喃妥因、復方新諾明、慶大霉素、鏈霉素、青霉素、丙氟哌酸、頭孢他啶、利福平、磺胺嘧啶、新生霉素。還做了平板凝集試驗和生化試驗。?
2 結果與分析?
2.1 鏡檢、血清型鑒定和生化試驗結果?
病料涂片染色與病料接種培養后染色鏡檢，均檢測到革蘭陰性短桿菌。選擇攻毒試驗中對雞呈現高致病力的菌株 a、b、c、d、e與禽大腸桿菌 O型單因子血清分別進行平板凝集試驗，三個樣A、B、C的血清型鑒定鑒定結果都包含O1、O2、O78。A、B、C三個群體總共30只病例中，有 16只分離株是可以定型的，其中以 O1、O2、O78為主，這三種血清型在種類上占總量的 53.3%（16/30）因此，可以認為 O78、O1、O2 可能是綏化地區的優勢血清型。對分離的病原菌進行生化試驗，均能分解葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇及蔗糖，產酸產氣，初步判斷為大腸桿菌。?
2.2 動物回歸試驗結果及分析?
采用相同菌株攻毒，雞只死亡數量具體見表1。?
通過用6組菌株分別給6組雞攻毒結果來看，有4組都是陽性，其病理變化原發病雞基本一致。無菌采集病死雞臟器進行細菌學檢測，結果分離到與送檢病例一致的大腸埃希菌。?
診斷試劑范文第4篇
[關鍵詞] 流式細胞術；胸腔積液；p53
多種胸腔疾病均能導致胸腔積液，其中良惡性胸腔積液的鑒別診斷是臨床上的一個難題。雖然說目前的檢測手段比較多，但是仍然有一部分患者得不到及時的明確診斷。流式細胞術（Flow Cytometry， FCM）是一種在功能水平上對單細胞或其他生物粒子進行定量分析和分選的檢測手段，它可以高速分析上萬個細胞，并能同時從一個細胞中測得多個參數，與傳統的熒光鏡檢查相比，具有速度快、精度高、準確性好等優點，成為當代最先進的細胞定量分析技術[1]。P53是目前發現的與人類腫瘤密切相關的癌基因之一，因此通過檢測p53蛋白可以了解p53突變情況。本文采用流式細胞術對良惡性胸腔積液進行鑒別診斷。現將結果報道如下。
1 資料與方法
1.1一般資料
選擇在我院進行治療的胸腔積液患者20例為研究對象，所有患者均經過細胞學或組織學診斷明確。共收集標本20份。其中良性標本和惡性標本各10份。良性胸腔積液包括膿胸4例，結核性胸膜炎3例，其他3例。
1.2 研究方法
1.2.1 細胞培養 取出細胞凍存管放入37攝氏度的水浴中，溶化后，酒精消毒瓶口，取出懸液，加入培養液10ml 離心，去上清后再重復以上步驟一次。然后加入培養液后轉入培養瓶，在37攝氏度5%CO2條件下進行培養，更換培養液，繼續培養。每天觀察細胞培養情況，符合情況后，棄去培養液，PBS液沖洗一次。加入消化液，當細胞完全從瓶上脫落后，加入培養液停止消化。收集細胞，離心后去上清，加入培養液繼續培養。在收集細胞前24小時換1次培養液，然后消化液消化，培養液終止消化，細胞計數，濃度定為5×106個/ml。吸取培養液和消化液后，加入凍存的培養液，制成細胞懸液后置入無菌凍存管，每管1-1.5ml。置入液氮罐中凍存。待測。
1.2.2 流式細胞術 胸水200-500ml。加入抗凝劑，分裝后，離心去上清。洗滌后再次離心取上清。對紅細胞沉淀較少的標本，加入紅細胞裂解液，混勻后靜置10min，離心去上清。PBS液洗滌細胞2次，離心后去上清。冷存后待測。紅細胞沉淀多的標本加入白細胞分離液，PBS液洗滌，混勻后貼壁加入含有白細胞分離液的試管中，離心，中層為白細胞，取中層離心去上清，PBS洗滌1次后離心去上清，冷存后待測。
1.2.3 p53檢測 采用直接免疫熒光標記法。調整標本細胞混懸濃度為1×106個/ml，分別加入兩個待測管，為測試管和對照管，每管50μL。加入固定液混勻。室溫下培育15分鐘，加入PBS液洗滌后離心去上清，加入穿透液混勻，室溫下培育5分鐘。測定管加入p53抗體2μL，對照管加入小鼠同型對照，混勻。室溫避光培育30min。加入PBS液洗滌后離心，棄上清。后加入PBS液500μl重懸細胞，篩網過濾，檢測。采用流式細胞儀測定p53。
1.3 評價指標
p53平均熒光強度>1.0為陽性，p53陽性細胞百分率>90%為陽性。細胞學檢查檢測出惡性癌細胞為陽性。
1.4 儀器與試劑：使用FACS calibar流式細胞測定儀（美國BD公司生產）與配套的熒光免疫試劑。
1.5 統計學方法
采用SPSS12.0統計學方法進行數據處理。計量資料采用均數±標準差表示，采用t檢驗。P
2 結果
2.1 良、惡性胸腔積液p53陽性細胞百分率比較
惡性胸腔積液p53陽性細胞百分率為（91.8±30.6）%，良性胸腔積液p53陽性細胞百分率為（38.5±14.1）%，兩組比較，差異有統計學意義（P
2.2良、惡性胸腔積液p53平均熒光強度檢測
惡性胸腔積液p53平均熒光強度（4.98±2.12），良性胸腔積液p53平均熒光強度（0.47±0.10），兩組比較，差異有統計學意義（P
2.3 p53平均熒光強度與p53陽性細胞百分率的相關性
見表2。p53平均熒光強度與p53陽性細胞百分率的診斷符合率為90%（18/20），具有較高的診斷符合率。
3 討論
胸腔積液的良惡性鑒別是臨床的常見問題。惡性腫瘤在一些情況下雖然導致胸腔積液，但是積液內的惡性細胞并不多，而其他原因如腫瘤繼發的肺不張、合并心力衰竭等導致的胸腔積液與良性疾病難以鑒別[2]。目前用于鑒別胸腔積液良惡性的方法比較多，但有一定的局限性。
流式細胞術在臨床上的應用越來越廣泛，可以用于分析細胞周期，不受細胞增生狀態的影響。p53基因可以抑制細胞向惡性轉化，因其不能修復細胞的凋亡，當p53發生突變的時候，會喪失正常的功能，不能調控細胞的增殖[3]。本文的研究結果顯示，采用流式細胞術檢測p53蛋白，惡性胸腔積液的陽性率顯著高于良性胸腔積液。而p53表達的熒光強度也高于良性胸腔積液，兩個結果具有高度的相關性。兩個結果與細胞學檢測結果也具有高度的相關性。
綜上所述，采用流式細胞術檢測胸腔積液細胞p53蛋白的陽性細胞率可以用于良惡性胸腔積液的鑒別診斷。
[參考文獻]
[1] 張韞，楊鑫，李忻. 流式細胞術在臨床檢驗中的應用。中日友好醫院學報，2012，26（5）：303-306.
診斷試劑范文第5篇
關鍵詞：癲癇；腦電圖；診斷
中圖分類號：R741.044；R742.1
文獻標識碼：A
文章編號：1008－2409(2007)03－0621－03
癲癇是一種常見病和多發病，而癲癇發作是可治的病癥，關鍵是在發病早期能得到正規的合理的治療。癲癇發作可與許多發作性疾病相混淆，而腦電圖(EEG)是一種無創、價格低廉、方便有效并為臨床廣泛使用的檢查手段，是診斷癲癇的金指標。但常規腦電圖對癲癇的檢出率不足30％，因此，尋找和開發新的、安全有效的檢查手段具有非常重要臨床價值。動態腦電圖及誘發試驗在近幾年得到了迅速的發展，明顯提高癲癇患者發作間期癇樣放電(EFO)的檢出率，同時對與發作性疾病的鑒別診斷有非常重要的意義。
1 腦電圖誘發試驗的基本原理
1．1腦電圖的基本原理
EEG與腦生物代謝密切相關。多環節和多層次電化學過程產生細胞外電流即經頭皮可描記的EEG，是大腦代謝所產生的一種現象。其中任何一個環節或一種成分破壞都可產生異常改變，故腦電圖可發現腦部各種損害，特別是識別癲癇患者癲癇樣放電。癲癇發病時興奮性神經遞質含量增高，神經元興奮性增強，而抑制性神經遞質含量減少，抑制作用減弱，興奮與抑制平衡失調，導致細胞游離鈣水平升高，誘發神經元過度興奮，產生癇樣放電。癲癇就是大腦皮層神經細胞過度同步放電的結果。用微電極記錄腦細胞內的電活動，可以發現各種癲癇灶的神經元在發作間隙期可出現一種特殊電現象，即發作性去極化偏移(PDS)。PDS是病灶內神經元產生反復去極化引起持續時間較長的高波幅和高頻率棘波放電。當大腦皮層某一點由PDS而產生癲癇樣放電，其鄰近區域神經元也產生同步放電，同步放電的結果使整個區域產生癲癇樣放電，神經元去極化發展到一定高度就有棘波形成。目前的動態腦電圖鑒測，方法是將電極安裝在患者頭皮上后，導線可插到帶有放大器的腰盒，腰盒內除放大器外，還有錄音帶或光盤以供記錄腦電訊號，待檢測完畢后，把記錄到的腦電訊號放到主機熒光屏顯示。
1．2誘發試驗的基礎原理
腦電圖誘發試驗是指在清醒安靜閉目狀態下描記的腦電圖，有可能是正常或輕度異常，但如果給予能改變大腦興奮水平的直接或間接刺激，或者改變患者的生理學、生化學條件，使患者處于與安靜時不同的狀態，有時就誘發出潛在性異常所見或者能使已經存在的異常所見顯得更明顯。比較廣泛被使用的有以下幾種。
1．2．1過度呼吸、睜閉眼、閃光刺激的誘發試驗(即常規誘發試驗)①過度呼吸誘發試驗是指患者由于過度呼吸(每分鐘有20～50ml空氣交換)血中二氧化碳濃度低下成為堿中毒狀態，結果引起腦血管收縮，腦血流減少，造成腦細胞環境的變化，易發生異常波。②睜閉眼誘發試驗主要用于了解大腦在視覺刺激時的反應情況。⑨閃光刺激誘發試驗是用強烈光線作閃光刺激視網膜引起腦電圖的變化，可誘發出發作性的異常波和臨床發作。
1．2．2 睡眠剝奪和睡眠誘發試驗 睡眠剝奪是指受試者少睡覺，最好24h不睡，增加身體的生理負擔從而降低了抽搐閩值，使陽性率增加。睡眠誘發是指只睡眠時由于中腦網狀結構上行性激活系統機能的低下，大腦皮層和邊緣系統脫離了激化系統的控制，結果造成發作波發生的適宜條件。
1．2．3 藥物誘發試驗 最常見是貝美格誘發試驗。貝美格(Bemegride，BM)又稱美解眠(Regicide)是一種中樞神經系統興奮劑，結構與巴比妥類似，系巴比妥類競爭性拮抗劑。貝美格可提高中樞神經系統興奮性，對癲癇的患者可明顯提高檢查時癇樣放電陽性率。
1．2．4癔病誘發試驗癲癇可與許多發作性疾病相混淆，最常見的一種是癔癥性非癇性發作。癔癥患者往往伴有很強的暗示性。癔病誘發試驗就是運用癔癥患者很強的暗示性，在暗示誘發發作后記錄腦電圖。80年代Cohen等16]就應用了癔癥誘發試驗，獲得了良好鑒別癇性發作與癔癥性發作的效果。癔病誘發試驗操作法現有多種，如靜脈注射lO％葡萄糖酸鈣10～15ml，出現溫熱時即可發作，或者給予靜脈注射生理鹽水即可發作。但不論用何種方法，核心是在做癔病誘發試驗(HPT)之前要針對該方法的內容做好暗示。
2 在癲癇診斷中的臨床價值
癲癇的診斷必須有反復癲癇發作和引起這種發作的細胞過度放電即癇樣放電(EFD)。沒有癇樣放電的癲癇是不存在的或非癲癇性的，有癲癇發作就一定有癇樣放電，故發作的腦電圖的異常已成為癲癇診斷的基本要素之一。按照國際腦電圖和臨床神經生理聯盟名詞委員會所下的定義：癇樣放電是指突然發生的并與背景或基本電活動相區別的放電。常見的癇樣放電①棘波：指時程為20～80ms的放電可為單相、雙相或三相，以雙相為多，主要是負相。②尖波：指時程為70～200ms或以上的突發放電。③棘慢波、尖慢波：指由一個棘波或尖波后面緊隨一個慢波按順序出現。④其他：多棘波、多棘慢波、3Hz棘慢波，2.5Hz以下的尖一慢波。目前，常規的過度呼吸、睜閉眼、閃光刺激的誘發試驗，能捕捉到癇樣放電的7％～30％。有些誘發試驗可進一步提高EFD的檢出率。解學禮報告對50例常規腦電圖未見異常的癲癇患者和15例健康志愿者24～34h禁睡后記錄腦電圖，結果癲癇組EFD檢出率為42％而健康組15例中無1例有EPD。李曉燕報告對64例癲癇患者行剝奪睡眠一睡眠聯合誘發試驗，其中大發作14例，小發作8例，局限性發作10例，精神運動性發作7例，植物神經性22例，不能分類3例，常規腦電圖未見異常或可疑。結果剝奪睡眠誘發后有30例陽性(占75％)，大發作14例有8例陽性，局限性發作10例有7例陽性，精神運動性發作7例全部異常，失神發作8例有6例陽性，植物神經性發作22例有14例陽性，不能分類3例中有2例陽性。白勤等對98例臨床確診的癲癇患者分別進行常規腦電圖檢查和剝奪睡眠誘發及睡眠誘發腦電圖試驗。結果常規腦電圖檢查異常78例，占80.4％，剝奪睡眠腦電圖異常86例，占87.8％，睡眠誘發腦電圖異常80例，占81.6％。睡眠誘發有2種：①自然睡眠。②藥物睡眠。自然睡眠優于藥物睡眠，睡眠誘發是安全可靠、較為理想的符合生理學的方法。潘映輻等對478例行貝美格誘發試驗(EEG．BMT)，結果EEG―BMT對癲癇組EEG陽性率可提高到80.2％，但非癲癇組的陽性率亦達37.5％。但值得指出的是顳葉性發作44例的BMT陽性率高達91％，其中局灶性EFD為52.5％，對輔助臨床診斷起到了一定的作用。國內有作者報
告Its]，對49例常規EEG無EFD的癲癇患者和22例癔病性痙攣發作者進行EEG－BMT，結果癲癇組EFD發生率為96％，而癔病組EEG均未見異常反應。
3 在鑒別診斷中的作用
癲癇可與許多發作性疾病相混淆，最常見的一種是癔癥性非癇性發作。癔癥占門診患者的18％～23％，住院患者中占5％～15％，而且難治性癲癇(IE)中有癔癥者占5％～20％。癲癇與癔病的關系爭論了數個世紀。若不正確診斷，將導致不必要的抗癲癇治療和其他如就業、擇偶及人際關系一系列問題。而不恰當地應用抗癲癇藥物不但對發作沒有幫助，實際上還可能誘發或增加發作，使發作頑固性。因此，及時地識別和診斷發作的性質非常必要。Langcman等靜脈注射生理鹽水誘導法對癲癇與癔病發作的鑒別敏感率為77％，特異性為100％。潘映輻等1983～1986年曾對108例患者進行了HPT的EEG和臨床觀察(第1組疑為癔病63例，第2組為IE疑伴有癔病發作13例，第3組肯定為非癔病的和不伴癔病的其它發作者32例)。結果第1組中53例陽性(84.1％)，第2組6例為陽性(46.2％)，第3組無1例HPT陽性者。經1年以上隨診第1組余10例中8例為癲癇，2例為癔病；第2組另7例僅為IE；癔病和伴癔病者61例，HPT陽性者59例，陽性率為96.7％，無假陽性，亦無明顯不良反應。李國良等[1釘對96例發作性疾病患者進行24h動態腦電圖監測及癔病誘發試驗(AFFG－HPT)研究。結果，難治性癲癇疑伴癔病組18例中14例陽性為77.8％，癔病或癲癇發作診斷不定組36例中24陽性為66.7％，癲癇組18例1陽性為5.6％，癔病組24例中22陽性為91.7％。96.O％的患者明確診斷。
