傷仲永練習

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傷仲永練習范文第1篇

在解析《八女投江》的舞蹈時，需要從心理學角度始終關注舞蹈演員的表情；這是由于表情可以反映舞蹈演員的戰爭時的狀態。假如不能將舞蹈演員的肢體語言與表情融合起來看，那學員就極難從肢體語言中發現八女誓死抗戰的英勇信仰以及百折不撓的英雄胸懷。單單從舞蹈動作的視角來看，在《八女投江》中，舞蹈演員對戰爭場面的描述毫不拖泥帶水，從攻擊和防御以及貼身搏擊等動作可以看出戰爭態勢的變更，而這些都能通過舞蹈演員的表情和肢體語言看出來。在賞析《八女投江》時，應利用心理學理論中的換位思維、場景替換等教學手段，讓學員與臺上的“女兵”進行角色的置換，讓學生以自身的心理狀況為切入點，去揣度“八女”的心理狀態，透過學生的三觀與“八女”的三觀的懸殊落差去刺激學生的心理，讓所有學員了解女兵的心理，并對其舍身成仁的舉動充滿敬仰之情，進而通過學生的自我心理暗示，用自身所擁有的舞蹈技巧在學習中去把握女兵在戰爭中的堅強和果敢的品質。在此前提下，老師應強調舞蹈中的細微末節，并引導學生加深對這部分細微末節中的舞蹈動作的印象。如此，學生不但能明了舞蹈中舞蹈演員們每個動作所包含的深意，也能完整地看到舞蹈的過程，領略《八女投江》的魅力，這對日后的表演助益甚大。

2、心理學在舞蹈排練課教學中的應用

在舞蹈賞析與排練課的進行過程中，在舞蹈賞析之后就輪到舞蹈排練“粉墨登場”了。而舞蹈排練的重要目標，就是透過舞蹈動作的排演讓學生領略舞蹈的精髓；與此同時，在排演中傳授給學生舞蹈表演中慣常運用的技巧也顯得十分重要。筆者還是以《八女投江》為例進行說明。

2.1、表情改變

在排練課教學中，老師應想方設法使學生“身臨其境”，創設真實感極強的課堂氛圍。具象化地說，即老師應誘導學生“回到”戰火紛飛的特殊年代，讓其想象自己身處流彈亂飛、四面楚歌的戰爭場景中，之后老師應通過親自演示和解說展現給學員：彎腰是為了躲子彈；亦步亦趨地退后是為了更清楚敵人的情況。在對表情的講授中，老師應著重指出：戰爭是激烈的，女兵的表情是恐懼的，這是由于每位戰士都是活生生的人，面對大勢已去的戰爭局面不可能完全做到泰然處之，都會或多或少地露出恐懼的表情；與此同時，女兵的表情又是剛強和果敢的，這是由于女兵的心中有著舍身成仁的意念。在排練課教學中，老師應運用心理學中的表情圖面讓學生看到人類臉部表情的微小變化，進而誘導學生通過表情甚至微表情來呈現自己的心理狀態。因為學員在接受表情輔導前有著一些表演的經驗，因此其對表情的細微差別會尤其留意，排練的功效比老師單調的口頭演示要好。

2.2、技術動作

在舞蹈排演時段，透過老師對女兵每一個肢體語言背后的心理狀況的敘述和解讀，學生就能以自身的視角為切入口，將自身的舞蹈技巧結合到舞蹈表演中去，用自身的特有風格去演繹舍生取義的女兵形象。然而對學員來講，盡管其能從心理學的角度解讀某些獨立的舞蹈情景中舞蹈演員所要傳達的精神以及深意，然而學員們畢竟沒有真實體驗過戰爭的嚴酷，他們對戰爭的了解顯然是較為淺顯的。在該類狀況下，很多舞蹈技術動作的細節就很難被完整體現出來。例如：《八女投江》中有許多蹬踏敵人的動作，而在這部分動作中，“敵人”是被幻想出來的，它需要舞蹈演員獨自用蹬踏的動作來展示戰爭的激烈。因此，該動作就需要經過鍛煉才能做到位，這個細節是觀眾領略戰爭的殘酷的關鍵。在表演這個場景時，老師在排練課中應先讓學員做出蹬踏或踹蹬的動作，并將動作做出時女兵的心理狀態融入動作中，讓學生明白：實際上，觀眾對踹蹬動作的解讀并非只著眼于踹蹬的力量，而更多的是透過觀察演員的表情以及眼神去解讀的。透過這種排練，學生才能明白怎樣獨立完成一個需要多人協調的動作。而融合了心理暗示的排練教學，就能使學生明白舞蹈藝術的價值并不是完全靠動作去呈現的，還有心理狀態也十分關鍵，這對學員日后的表演有著相當大的幫助，也能使學生的舞蹈之路走得更為順暢。

3、關于心理學與舞蹈

心理學理論能夠協助學生在舞蹈表演中建立一個良好的心態，這種良好的心態即指生活在社會環境中的個人，在高層次神經功能正常的狀況下，智力正常、情緒平穩、行為適當，具備協調能力以及適應環境的能力以及特點。良好的心態是保障舞蹈動作正常甚至超水平發揮的前提，是舞蹈演員以及舞蹈老師應兼備的基本素質。唯有優良的心態才能在壓力之下淡定，并在舞臺上收獲成功與喜悅。因此，作為舞蹈人員或學員，需要在賞析和排練的過程中學習一些心理學理論，在舞蹈的職業生涯中遇到問題時才能泰然處之，并提升自己的舞蹈水平和抗壓能力。

4、結束語

傷仲永練習范文第2篇

隨著互聯網在社會經濟各行業的普及，網絡信息更加碎片化、實時化、個人化的同時，人們對互聯網信息的需求也急速上升。隨著3Gr代的到來，移動互聯網應用技術的進步，移動電子商務作為一種新型的電子商務方式，利用了移動互聯網絡的技術優點，促進生產銷售的強勁而穩定的增長。在移動互聯網基礎之上所進行的移動電子商務是移動互聯網為用戶提供的一種重要的服務。

【關鍵詞】移動互聯網 移動電子商務 移動終端 移動支付

移動互聯網是近年來發展的新鮮事物，移動互聯網與電子商務相結合，產生大量的創新性應用與機會，有些應用甚至深刻地改變某些傳統的行業。同時人們已經不再滿足于個人電腦的連線上網，越來越多的人因為職業和生活的需要，希望隨時隨地收發電子郵件、查閱新聞、股市行情、訂購各種急需商品，即實現移動互聯，在移動互聯網和移動通信的有關技術支持下，移動電子商務得以迅速發展。

1 移動互聯網和移動電子商務概述

移動互聯網是一種通過智能移動終端，采用移動無線通信方式獲取業務和服務的新興業態，包含終端、軟件和應用三個層面。隨著技術和產業的發展，未來，LTE（長期演進，4G通信技術標準之一）和近場通信移動支付的支撐技術等網絡傳輸層關鍵技術也將被納入移動互聯網的范疇之內。

移動電子商務是由電子商務的概念衍生出來的。它是指利用依靠移動通信網和Internet，利用手機、PDA及掌上電腦等無線終端進行的B2B、B2C、C2C或O2O的電子商務。它將因特網、移動通信技術、短距離通信技術及其它信息處理技術完美地結合，使人們可以在任何時間、任何地點進行各種商貿活動金融活動和相關的綜合服務活動等。

2 移動互聯網和移動電子商務的發展現狀

2.1 移動互聯網的發展現狀

在我國互聯網的發展過程中，PC互聯網已日趨飽和，移動互聯網卻呈現井噴式發展。由前瞻產業研究院的《中國移動互聯網行業市場前瞻與投資戰略規劃分析報告前瞻》數據顯示，截止到2013年底，中國手機網民超過5億，占比達81%。隨著寬帶無線接入技術和移動終端技術的飛速發展，人們迫切希望能夠隨時隨地乃至在移動過程中都能方便地從互聯網獲取信息和服務，移動互聯網應運而生并迅猛發展。然而，移動互聯網在移動終端、接入網絡、應用服務、安全與隱私保護等方面還面臨著一系列的挑戰。

2.2 移動電子商務的發展狀況

隨著移動通信技術和計算機的發展，移動電子商務的發展已經經歷了3代。目前主流的是新三代的移動商務系統，采用了多種先進的移動技術相結合的第三代移動訪問和處理技術，使得系統的安全性和交互能力有了極大的提高。第三代移動商務系統同時融合了3G移動技術、智能移動終端、VPN、數據庫同步、身份認證及Web service等多種移動通訊、信息處理和計算機網絡的最新前沿技術，以專網和無線通訊技術為依托，為電子商務人員提供了一種安全、快速的現代化移動商務辦公機制。

移動電子商務在當今社會已經被越來越多的人熟知并使用，它涵蓋了金融、信息、娛樂、旅游和個人信息管理等領域。其主要應用領域包括網上銀行業務、網上訂票、網絡購物、娛樂服務、網絡比價、信息推送與分享等。

3 電子商務的移動互聯核心技術

隨著移動互聯網的迅速發展，電子商務也進入了各種移動終端設備中。 因特網、移動通信技術和其他技術的完美結合創造了移動電子商務，它的創新發展都會進一步推動移動電子商務的發展。

3.1 移動定位技術

移動定位：是指服務商通過移動互聯網向手機用戶提供的以定位、導航服務為核心，并包括其他衍生服務的業務，是一種新興的應用十分廣泛的移動互聯網技術新應用。

3.2 移動通信技術3G/4G

第三代移動通信技術，是指支持高速數據傳輸的蜂窩移動通訊技術。3G服務能夠同時傳送聲音及數據信息，速率一般在幾百kbps以上。移動電子商務還是依托于3G的發展，而相對于3G，4G能夠以100Mbps的速度下載，比撥號上網快2000倍，上傳的速度也能達到20Mbps，并能夠滿足幾乎所有用戶對于無線服務的要求，這對移動電子商務的發展也會帶來諸多的機會。

3.3 近場通訊技術

近幾年，“移動支付年已經來臨”這一說法甚是流行，而推動移動電子商務發展的關鍵因素，就是近場通信（NFC）。近場通信是一種基于標準的通信技術，能夠簡化交易，精簡數字內容的交換，通過接觸方式接入電子設備。

3.4 IPV6協議

IPv6是目前正在引入并逐步開展普及互聯網協議，它的提出是因為隨著互聯網的迅速發展，IPv4定義的有限空間將被耗盡，為擴大地址空間而產生的IPV6。由于其128位地址長度，幾乎可以不受限制地提供地址。這為無線通信與視頻識別（RFID）技術帶來無限的發展空間，特別是對地面移動終端數量劇增，能為每個設備分配一個永久的全球IP地址，所以能解決全球范圍內的網絡和各種接入技術之間的移動性問題。根據 2012 年 3 月七部委聯合下發的《下一代互聯網“十二五”發展建議意見的通知》，我國在 2013 年底前逐步開展 IPv6 的小規模商用試點，形成商業模式和技術演進路線，為全面部署 IPv6 做準備。

4 基于移動互聯網的電子商務應用

目前移動電子商務的表現形式包括遠程電商和近場電商，移動電商中的“遠程電商”是指傳統電商通過PC端的購物方式自然轉化為通過移動終端的購物方式。而“近場電商”是在“移動支付中的近場支付”與“O2O中的本地化服務”共同發展下衍生出來的一個便于理解的概念。它是指通過移動終端選擇本地化服務的消費場所，最后可以通過近場支付進行消費。目前較主流的應用方式包括以下幾點：

4.1 微信營銷

微信是國內最大的移動應用軟件，據統計，全國使用手機的用戶遠超于電腦PC用戶，在使用時間、使用方便性來講，移動用戶要比PC客戶端有更多優勢，隨著騰訊對QQ營銷諸多的限制，微信營銷以著使用用戶多、騰訊限制低、操作簡便、一對一傳播、效果強、年齡層精準等諸多優勢，讓微信營銷成為了現在最熱門的營銷方式。

4.1.1 微信與O2O電子商務

微信是未來移動互聯網最成功的一款產品。通過建立私密社交打通每個人現實的社交網絡，以朋友關系鏈構建的消費者群體營銷價值十分巨大。陌生人社交也在不斷滲透每個人的交友圈子，用人作為營銷工具去傳播，并最終形成人與人之間的閉環營銷。而O2O實質就是帶客到店。結合手機，到店就變得非常好辦，O2O所需要做的就是找一個點進行切入，那么口碑營銷、數據庫營銷、體驗營銷均可便捷實現。

4.1.2 O2O線上支付與線下商務的整合

微信的搖一搖功能可以依托微信的搖一搖、二維碼掃描等功能，將用戶導入到商家里面有針對性地開發出各種支付方式，實現O2O線上支付與線下商務的整合

微信搖一搖找出好友，直接在聊天窗口中向對方轉賬，無需對方的銀行賬號，搖一搖微信即可；去超市購物，不用排長隊交費，定期推送專屬的會員優惠 ，用微信拍下二維碼，就能直接手機支付即拍即買；這些都將不再是紙上談兵。 第三方支付公司財付通宣布，正式與微信合作搭建O2O支付平臺，實現微信即時支付的功能。圍繞“微生活”開通即時支付功能，實現一部手機走遍天下。

4.2 搜索引擎營銷

根據用戶使用搜索引擎的方式，利用用戶檢索信息的機會盡可能將營銷信息傳遞給目標用戶。

搜索引擎營銷的主要模式與方法有：免費登錄分類目錄、搜索引擎優化、 付費登錄分類目錄、付費關鍵詞廣告、關鍵詞競價排名。

4.3 移動支付

隨著通訊技術和信息技術的快速發展，手機已經成為我國最普遍的通訊工具。在此基礎上，伴隨著互聯網、移動通信和計算機技術的快速發展和相互融合，憑借手機作為移動終端的支付應運而生。目前國內移動支付參與方由電信運營、商業銀行及卡組織、支付寶等第三方服務的提供機構。

借助移動電子商務，用戶能夠通過其移動通信設備進行網上購物。隨著智能手機的普及，移動電子商務通過移動通信設備進行手機購物，讓顧客體會到購物更隨意，更方便。

如今比較流行的手機購物軟件如“掌店商城”等，它可以實現足不出戶就能進行商品查詢、商品檢索預訂、移動支付等活動，為客戶提供裝在口袋中的電子商店，讓顧客盡享購物的便利。

4.4 移動票務

移動用戶訂購車船票、查詢航班和定購機票以及定購演出票等，為用戶提供隨時隨地的貼身票務服務。用戶還可以進行票詹檠、票務預訂、移動支付等活動，同時可以使用短消息系統實現票務信息的點播與發送、訂票確認、及時提醒等功能。

4.5 移動銀行

它能提供個人理財服務，實現賬戶信息查詢、存款賬戶間轉賬、銀行轉賬、證券買賣、個人實盤外匯買賣、代繳費、金融信息查詢等功能。

5 結語

當今的社會是個飛速發展的社會，很多的移動互聯技術從研發到試行，再到普及的周期越來越短，移動電子商務從新生事物到現在變成人們經濟生產發展中的不可缺少的組成部分。這個過程都體現出移動互聯網技術的開放性、前瞻性、重要性、可持續性，未來人們還繼續開發出更多的移動技術、拓展移動互聯網的應用形式來提升移動電子商務水平，讓更多的人得到便利。反之移動電子商務的流行會促進技術向多學科、多層次、多平臺、多體系發展，做到兩者的有機結合，共同為社會發展，公司個人的商務來往提供技術條件和交易平臺的保障。

參考文獻

[1]關于印發下一代互聯網“十二五”發展建設的意見的通知[Z].發改辦高技〔2012〕705號.國家發展改革委辦公廳，2012.

[2]移動電商市場在哪里[Z].億邦電商社區，2013.

[3]鄭詩鋒.移動電子商務的技術支持及應用研究[J].武漢科技學院學報，VOL.17 NO.4，2004-8.

傷仲永練習范文第3篇

[關鍵詞] 熵權法 灰色關聯分析 供應商選擇

一、引言

供應鏈合作伙伴關系（Supply Chain Partnership，SCP）是供應商與制造商為實現某個特定目標，在一定時期內共享信息、共擔風險、共同獲利的協議關系，因此，合作伙伴的選擇是供應鏈合作關系的基礎。供應商的選擇過程是一個典型的多目標決策問題，在用灰色關聯進行分析的過程中，灰色關聯度的計算實際上是將各項指標等權劃分，這樣會因為沒有考慮到各指標重要性差異和允許指標屬性之間可以相互線性補償，且被補償的值不受任何限制而導致存在信息流失、誤差大等缺陷，而采用主觀賦權法又無法消除各因素權重的主觀性。借助信息工程學中“熵”的概念，在多方案評定中能夠對每個指標的重要程度尤其是對重要屬性指標都加以考慮和保證，客觀地揭示出各評價指標的重要性。因此，決策算法采用基于灰色關聯度的灰色綜合評價決策模型，運用信息熵來確定指標權重。

二、算法原理

灰色關聯分析的基本思路是根據各比較數列構成的曲線與參考數列構成的曲線的幾何相似程度來確定比較數列與參考數列之間的關聯度，幾何形狀越接近，則關聯度越大。

灰色關聯分析把各項指標等權劃分，無法給出各評價指標的重要性差異，而按照信息論觀點，各個指標在指標體系中的作用，與指標的變異度有關，指標的變異度越大，它所攜帶和傳遞的決策信息越多，對方案的比較作用也越大。信息量的大小可用熵值來測度，熵值的減少意味著信息量的增加。熵值法根據各指標的信息載量的大小來確定指標權重。熵值法的最大優點是其計算得到的權重完全是依據屬性矩陣所帶的信息，沒有任何主觀判斷，能夠得出較為客觀的綜合評價結果。

1.指標規范化處理

設原始指標屬性矩陣，則對效益型指標規范化處理，有：,;對成本型指標規范化處理，有。

2.各指標灰色關聯系數的計算

設表示各屬性值中的最優解，取組成的最優方案作為參考序列，以第i方案屬性值作為比較序列，則xo與xi在第j項指標下的關聯系數計算公式為:,式中，、分別為比較序列絕對差中的最小值和最大值，為比較序列的絕對差，為分辨系數，取值范圍為，通常取。

3.熵值法計算權重的步驟

（1）設原始指標屬性矩陣中為第i方案在第j指標下的指標屬性值，則第i個方案對第j個指標屬性的貢獻度為:。

（2）對于此貢獻度所包含的信息內容，可以用熵Ej來表示所有方案對第j個指標的貢獻總量，計算公式為:,，其中取，,。

（3）定義第j個指標下各方案貢獻度的差異系數，其計算公式為：，則當gi越大時，指標越重要。

（4）將其指標權重歸一化就得到各評價指標的權重，其計算公式為:。

4.計算綜合評價值

綜合評價值的計算公式為:值越大說明方案i與最優方案的接近程度越高，因此可根據Di值的大小對各方案進行優劣決策分析。

三、算例分析

影響供應商選擇的因素有很多，結合企業的實際，主要的評價指標有9個：產品合格率、產品價格、售后服務、地理位置、技術水平、供應能力、經濟效益、交貨情況、市場影響度。具體數據見表。

表 某企業選擇供應商的指標評價相關數據

其中產品質量、技術水平、供應能力、經濟效益、交貨情況，市場影響度指標屬于效益型指標；產品價格、售后服務、地理位置指標屬于成本型指標。根據灰色關聯系數的計算步驟對表1中數據進行規范化處理后得到的灰色關聯系數矩陣為：

由表中數據，根據熵值法計算權重的步驟得到各指標的權重為：wj=[0.0085，0.0090，0.2411，0.2744，0.2440，0.0496，0.0992，0.0084，0.0657]。

用計算綜合評價值公式計算得到各方案的綜合評價值為：Di=[0.4834，0.4965，0.5123，0.6661，0.6008，0.6628]，得到最優方案為：D4>D6>D5>D3>D2>D1。

四、比較與結論

雖本文的計算結果與參考文獻[3]中的結果(D6>D4>D5>D1>D2>D3)不完全一致，但文獻[3]中采用的傳統TOPSIS法沒有考慮各評價指標權重的差異性，而本文采用的方法能夠克服在方案評定中由于忽視各指標重要性差異，僅以指標與正、負理想指標之間偏離程度作為方案的判斷依據而帶來的信息流失、誤差大等缺陷。參考文獻[4]中采用的案例與參考文獻[3]及本文中的案例一致，但對TOPSIS法進行了賦權改進，其計算結果與本文基本一致：最優供應商均為供應商4，次優供應商均為企業6，其余供應商優劣排序不同，其原因在于本文與參考文獻[4]采用的方法不同，體現出不同方法的適用性和差異性。但本文所采用的方法概念清晰，計算簡單方便，更適合于在具體實際工作中應用。

參考文獻：

[1]孫元欣:供應鏈管理原理[M].上海:上海財經大學出版社，2003

[2]鄧聚龍:灰理論基礎[M].華中科技大學出版社，2002

傷仲永練習范文第4篇

[關鍵詞] 解偶聯蛋白2；PM2.5；H9C2；心肌細胞；線粒體；活性氧；ATP

[中圖分類號] R730.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2015）01-40-05

[Abstract] Objective To investigate the effect of UCP2 during the injury procedure of PM2.5 on the rat myocardial cells H9C2. Methods Rat cardiomyocytes H9C2 cell lines were cultured， after 48 hours of given PM2.5 and （or） siRNA stimulus， creatine kinase （CK） and lactate dehydrogenase （LDH） were detected. The expession of UCP2 in transcription and translation levels was detected by RT-PCR and Western Blot respectively. Mitochondrial reactive oxygen species （ROS） and ATP enzyme activity were determinated by colorimetric detection. Results Compared with the PM2.5 group， CK and LDH were elevated （969±21 vs 747±29 U/mL，1071±59 vs 877±47 U/L）， ATP activity decreased （24.7±4.7 vs 40.2±4.9 U/mgprot）， intracellular ROS increased （90.2±6.2 vs 69.2±6.3 U/Well） in the PM2.5+siRNA group. And the differences were statistically significant （P

[Key words] UCP2； PM2.5； H9C2； Myocardial cells； Mitochondria； ROS； ATP

近年來，大氣污染備受關注，其中顆粒物是城市大氣污染的重要物質。根據粒徑大小可將其分為空氣動力學直徑介于2.5～10μm粗顆粒物（PM10）和空氣動力學直徑小于2.5μm的細顆粒物（PM2.5）。PM2.5與人體健康關系最密切。PM2.5化學成分復雜，包括無機成分、有機成分、微量重金屬元素、元素碳等，主要來自于人類活動如工業生產及交通運輸工具尾氣排放、工業生產及取暖的燃燒釋放、吸煙的煙霧釋放等[1]。

動物試驗及臨床流行病學調查顯示，PM2.5與

人類心血管疾病有密切關系。PM2.5可促進心肌細胞變性和間質細胞增生，進而導致以心肌間質纖維化為主要表現的心肌重構[2-3]；可以通過氧化應激反應損傷血管黏膜，引起血管通透性及血液黏度增加，加速主動脈和冠狀動脈粥樣硬化和斑塊破裂過程[4-5]；可以誘發心律失常、心肌缺血甚至心跳聚停等[6-7]。我們前期研究也表明，PM2.5可以導致H9C2心肌細胞線粒體損傷，導致活性氧（reactive oxygen species，ROS）產生過多，ATP合成減少，線粒體膜電位損害。解偶聯蛋白（uncoupling proteins，UCPs）是線粒體內膜上能夠通過轉運H+降低線粒體膜電位蛋白家族，與細胞內的ATP及ROS有著密切的關系[8-9]。在5種同類物中，UCP2分布最廣泛，體內和體外的研究發現，UCP2可以通過降低膜電位，減少ROS產生進而保護神經細胞組織[10]。

然而，UCP2在PM2.5導致的心肌細胞損傷過程中作用如何？目前研究甚少。本課題擬通過RNA干擾技術，沉默H9C2心肌細胞的UCP2表達，檢測PM2.5毒染心肌細胞的ROS、ATP改變及心肌細胞損傷指標，初步探討UCP2在PM2.5導致的心肌細胞損傷過程中的作用。

1 材料與方法

1.1 RNA干擾片段

由上海吉凱基因公司合成2條RNA干擾片段和1條陰性對照RNA干擾片段，分別為siRNA1，siRNA2和ncRNA。siRNA1序列為：上游，5’-GCA CUG UCG AAG CCU ACA A dTdT -3'；下游，5’-UUG UAG GCU UCG ACA GUG C dTdT -3’。siRNA2 序列為：上游，5’- CCU CAU GAC AGA CGA CCU C dTdT -3’；下游，5’- GAG GUC GUC UGU CAU GAG G dTdT -3’。ncRNA序列為：上游，5’- UUC UCC GAA CGU GUC ACG UTT -3’；下游，5’- ACG UGA CAC GUU CGG AGA ATT -3’。

1.2 siRNA轉染步驟

（1）轉染前1d，5×104H9C2細胞接種在24孔板上，0.5mL完全培養基，轉染前細胞匯合達到70% ～ 80%；（2）在50μL無血清培養基加入2μL的siRNA，柔和混勻；（3）混勻lipofectamine試劑，用50μL無血清培養基稀釋1μL的lipofectamine試劑，輕輕混勻，室溫放置5min；（4）將稀釋好的siRNA和lipofectamine試劑混合，輕柔混勻，室溫放置20min，以便形成siRNA-ipofectamine復合物；（5）將100μL的siRNA-ipofectamine復合物加到含400μL完全培養基的細胞孔中，來回輕柔搖晃細胞培養板；（6）細胞在37℃，5%CO2培養箱中，培養24h，檢測轉染后UCP2的表達情況。用siRNA-CY3（廣州瑞博公司）轉染，通過熒光顯微鏡進行效率驗證，計算轉染效率。本實驗轉染效率達到80%左右，說明該轉染步驟是可行的。

1.3 預實驗篩選

UCP2基因有效的干擾片段：將H9C2細胞隨機分成5組，即control組，lipo組，siRNA1組，siRNA2組，ncRNA組，分別給予同體積培養基、lipofectamine、siRNA1、siRNA2和ncRNA刺激，轉染步驟同1.2；轉染后48h檢測UCP2轉錄水平表達，步驟同1.4。

1.4 RT-PCR檢測UCP2基因表達

用TRIzol法提取H9C2細胞的總RNA，然后逆轉錄成cDNA，再以cDNA為模板進行擴增。根據讀取的CT值對基因進行相對定量。RT-PCR反應體系為：forward/reverse引物各0.25?L，SYBP Green PCR master mix 5?L，cDNA模板4μL。PCR進行45個循環，條件為：95℃，5min，95℃，15s，60℃ 30s。UCP2引物為：5’- GGG CAC CTG TGG TGC TAC CTG-3’（sense），5’-ATG AGC TTT GCC TCC GTC CGC-3’（antisense）；看家基因18s-RNA引物為：5’-CCA TCC AAT CGG TAG TAG C -3’（sense），5’-GTA ATG GCG GGT CAT AAG-3’（antisense）。

1.5 Western Blot檢測UCP2蛋白表達

用2×SDS裂解細胞，12000g/min 離心5min，提取總蛋白，然后用BCA法迅速進行蛋白濃度定量。提取的總蛋白，加入2×SDS蛋白上樣緩沖液（按1∶1的比例），100℃煮沸5min，-20℃保存備用。配置10% SDS-PAGE分離膠，5%的濃縮膠，微量進樣器吸取30?g樣品緩慢加入樣品孔中，用100V進行濃縮膠電泳20min，140V在分離膠中電泳40min。然后轉膜、封閉，加入一抗（proteintech 公司，貨號：11081-1-AP） 4℃過夜，PBST洗膜，加入二抗37℃反應1h，用化學發光法（ECL）顯影。

1.6 PM2.5的采樣及其配制

選取湛江市區汽車流量大、污染較重的地區為采樣點。用PM2.5采樣儀采集PM2.5，超聲震蕩，洗脫顆粒物，冷凍真空干燥成干粉，-20℃保存備用。配制：稱取一定量PM2.5干粉，經紫外線照射后加入培養基溶液混勻，配制成終濃度為10，50，100μg/mL的溶液進行預實驗。根據預實驗結果，本實驗選用50μg/mL作為細胞毒染劑量。

1.7 H9C2細胞處理及分組

H9C2細胞株購自中國科學院典型培養物保存委員會細胞庫，用10%小牛血清培養液，在37℃培養箱靜置培養；1～3d更換一次培養液。PBS輕柔沖洗，適量0.25%胰酶溶液消化等常規操作，進行傳代及實驗。當細胞生長至70%左右密度時，將細胞隨機分成三組，分別為NC組，PM2.5組及PM2.5+siRNA組，每組3個樣本。三組細胞分別給予常規的培養基，50μg/mL的PM2.5培養基，含PM2.5（50μg/mL）與siRNA（80nmol/L）的培養基刺激。48h后檢測相關指標。

1.8 肌酸激酶（CK）和乳酸脫氫酶（LDH）、ROS、線粒體ATP酶活力檢測

（1）H9C2細胞受刺激后48h，收集細胞培養基上清液，按照試劑盒說明采用比色法進行檢測CK和LDH濃度。乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒（比色法），貨號A020-1；肌酸激酶（CK）測定試劑盒（比色法），貨號A032；試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

（2）按照活性氧檢測試劑盒進行操作，購自碧云天，貨號S0033。簡要步驟為：各組細胞經過處理后，按照試劑說明用1∶1000無血清培養液稀釋DCFH-DA。去除細胞培養液，加入適當體積稀釋好的DCFH-DA。37℃細胞培養箱內孵育20min，然后用無血清細胞培養液洗滌細胞3次。用熒光分光光度計檢測[12]，激發波長488nm和535nm。

（3）ATP酶可分解ATP生成ADP及無機磷，測定無機磷的量可判斷ATP酶活力的高低。按照試劑盒采用比色法檢測ATP酶活力（購自南京建成生物工程研究所，試劑盒貨號：A016-1）。

1.9 統計學處理

所有計量資料均以（）表示，并采用SPSS18.0統計軟件進行統計分析。方差齊時，采用單因素方差分析進行統計，兩組間比較采用LSD法分析，P

2 結果

2.1 干擾片段的篩選

control組，lipo組，ncRNA組，siRNA1組和siRNA2組間UCP2基因mRNA相對含量有顯著差異（F=3244，P0.05）；與control組相比，siRNA1組，siRNA2組UCP2基因mRNA相對含量均顯著下降（0.983±0.07 vs 0.556±0.11，0.369±0.12，P

2.2 各組UCP2基因轉錄水平和蛋白水平的表達

NC組，PM2.5組及PM2.5+siRNA組間UCP2基因mRNA相對含量及UCP2蛋白條帶相對密度值均有顯著差異（F1=899，F2=1057；兩者P

2.3 各組H9C2細胞CK及LDH水平

CK和LDH是反映心肌細胞損傷的重要指標。本實驗發現，CK和LDH水平在PM2.5+siRNA組最高，在PM2.5組其次，在NC組最低，兩指標在三組間的差異顯著，均有統計學意義（FCK=429，P

2.4 各組H9C2細胞ROS和細胞內ATP的水平

細胞ROS水平和ATP活性是反映線粒體功能的重要參數。本實驗發現，PM2.5+siRNA組心肌細胞內ROS含量明顯高于PM2.5組，PM2.5組的ROS明顯高于NC組，三組兩兩之間差異均有統計學意義（FROS=86，P

3 討論

近年來，環境污染越來越受到重視。PM2.5作為大氣污染的重要物質，可作為載體吸附有毒重金屬、酸性氧化物、有機污染物、細菌和病毒等多種組分，嚴重危害人體健康。多項流行病學調查研究顯示PM2.5不但可增加高血壓、冠心病、糖尿病患者的心血管疾病發病率和死亡率，亦可增高健康人群心血管疾病發病率和死亡率[11-12]。PM2.5可誘發、加重人體的心血管病變，這一認識被越來越多的學者所認同。本實驗通過培養大鼠心肌細胞株，給予PM2.5刺激，發現CK和LDH明顯升高，提示PM2.5可以導致心肌細胞損傷。這與國內外學者發現的PM2.5對心血管系統的毒性作用相一致[13-15]。

線粒體是重要的細胞器，是細胞生物氧化和能量合成的重要部位，細胞能量的80%來源于線粒體的呼吸功能。此外，線粒體也是ROS產生的重要部位。正常的線粒體功能，是維持細胞內充足ATP合成和低濃度的ROS的必備條件。線粒體的功能障礙，常常導致線粒體產生過多的ROS和ATP的生成不足或過多消耗，導致細胞或機體的過氧化損傷和能量缺乏。解偶聯蛋白（UCPs）是線粒體上的質子轉運蛋白，屬于線粒體陰離子通道家族。UCPs基因有高度的保守性，有6個家族成員，在人僅表達UCP1-5。UCP2基因位于11號染色體，與UCP3緊密連鎖，相隔僅6000bp。UCP2蛋白廣泛表達于各種組織細胞，現在多數認為其是保護性因素[16-18]。在神經系統中的保護方面，UCP2可以通過解偶聯作用，將H+轉運入線粒體，降低膜電位，減少ROS產生，維持細胞內的ATP水平，達到保護細胞的作用[19-20]。

我們前期的實驗發現，PM2.5可以通過損害心肌細胞的線粒體，破壞線粒體膜電位和線粒體的超微結果，導致線粒體ROS產生過多，ATP合成減少，進而損害細胞。然而，UCP2是否在PM2.5損害心肌細胞的線粒體的過程中起著保護作用，目前研究很少。RNA干擾是研究基因的流行技術。本實驗通過設計UCP2基因的干擾片段，進行預實驗，篩選出siRNA2作為干擾序列進行進一步研究。siRNA2導致了UCP2基因在轉錄和蛋白均出現低水平的表達，為探討UCP2的在PM2.5毒性過程的作用提供了基礎。

本實驗發現，通過RNA干擾沉默UCP2的表達，會導致細胞內ROS產生增多和細胞內ATP含量的減少，后者更進一步導致細胞的損害，表現為CK和LDH的明顯升高。PM2.5導致的UCP2過表達可能是細胞的代償反應，抑制UCP2表達將促進細胞的進一步損害。這就間接地表明，UCP2可能是PM2.5導致心肌細胞損害過程中的保護因素。然而，本實驗也存在明顯不足：（1）僅僅采用了沉默基因方法，沒有嘗試過表達UCP2，再觀察UCP2的作用；（2）指標檢測方面沒有將線粒體膜電位及線粒體腫脹度，線粒體生物修復功能等方面加以研究UCP2的作用。

綜上所述，PM2.5可以導致心肌細胞損傷，代償性引起UCP2表達增加；RAN干擾UCP2表達后，會導致細胞內ROS過度增多及ATP活性下降，從而加重細胞的損害；這一結果間接地表明，UCP2基因在PM2.5導致的心肌細胞損傷過程中可能起著保護作用。

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傷仲永練習范文第5篇

［關鍵詞］ 工作流;工作流引擎;稽核系統［中圖分類號］N99［文獻標識碼］A［文章編號］1005-6432（2009）01-0107-03

前 言

聯通公司自從獨立運營以來，市場營銷政策靈活多變，聯通公司建立了完善的質量監督機制和閉環的管理流程，業務稽核是質量管理體系的重要組成部分，是閉環業務流程中的關鍵業務環節。利用信息化技術手段加強業務稽核工作，改變完全依靠人工稽核的工作模式，提高糾錯率，減少客戶投訴。因此，基于工作流的聯通電子商務業務稽核系統應需而生。

1 工作流技術

工作流是針對日常工作中具有固定程序的活動而提出的一個概念。其基本思想是通過將工作流分解成定義良好的任務、角色，按照一定的規則和過程來執行這些任務并對它們進行監控，達到提高辦事效率、提高企事業管理水平和競爭力的目的。工作流技術是工作流管理系統WfMS(Workflow Management System)中的核心技術，也是辦公自動化系統的關鍵技術，可監督、控制和協調業務過程。圖1為基本概念之間的聯系。

工作流模型由構成模型、組織模型、資源模型、工作流相關數據四部分組成。描述工作流的原語是Sequence、AND-Split、AND-Join、OR-Split、OR-Join和Ite-ration。存在四種路由關系:順序、并發、條件、循環。指一個獨立的處理實體，包括Actor、Group。角色是指在過程中對某項任務或相關任務集合具有訪問權限和完成能力的處理實體。是扮演一個或多個角色的物理實體，角色表示責任的集合。兩者的映射關系由授權完成。

2 工作流技術在聯通電子商務業務稽核系統中的分析與設計

2.1 聯通電子商務業務稽核管理系統簡介

該系統為了及時糾正營業過程中發生的各種差錯，聯通公司建立了完善的質量監督機制和閉環的管理流程，業務稽核是質量管理體系的重要組成部分，是閉環業務流程中的關鍵業務環節。本系統結合工作流技術，將聯通各營業部門基本業務如：接收交接單，稽核資料，傳遞，退回錯誤檔案，歸檔等由計算機自動化處理替換傳統的人工處理。

將工作流技術應用到聯通電子商務業務稽核管理系統中，就生成了相應的工作流管理系統，該系統提供了以下三種功能:

建立階段的功能：主要考慮工作流過程和相關活動的定義與建模功能；

運行階段的控制功能：執行工作流過程，并完成每個過程中活動的調控功能；

運行階段的人機交互功能：實現各種活動執行過程中用戶與IT 應用工具之間的信息交互。

2.2 工作流程設計

根據聯通電子商務業務稽核的實際工作過程，處理事務，及其相關聯的對各個部門的職能行使過程和各個分部門的單項事務處理過程進行歸納、總結，忽略內部的、個別的、不常發生的管理活動，從中提煉出共有的，有代表性的活動，將其歸納為錄入交接單、一級稽核、生成匯總表、接收一級稽核單據、二級稽核、移交檔案室、接收檔案移交、剔檔、歸檔九個活動對象，這九個活動對象的處理過程中，都是針對交接單進行的，因此把交接單看做本系統的實例。同時系統把這九個對象，作為流程組成的基礎類對象，由基礎類對象可以派生出相應的對象實例，不同的實例之間的不同順序的組合，形成了不同的工作流。

2.3 工作流引擎設計

工作流引擎是工作流管理系統的核心，它負責流程的向前，向后推動。伴隨業務流程的激活，引擎自動解析流程的走向，配合系統內置的對象，進行管理工作。系統會自動顯示當前工作的待處理內容，同時用戶也可以機動的設置，便于特殊流程的處理。流程引擎的監控工具會監控企業的流程處理過程，便于事后分析流程績效。流程引擎同時通過表單附件的形式管理非結構性數據。對業務流程的設計、執行、監控、分析、改進提供全面支持。幫助用戶在業務過程中，全面記錄過程流、協作流、信息流的內容，幫助用戶依據流程運行的事實和結果，進行有效的流程分析，以優化過程流的環節、降低協作流的時滯、壓縮資源流的成本，并實現流程的改進。工作流引擎是通過工作流模型、流程運行、流程監控的定義和維護而實現。

2.3.1 工作流模型

工作流模型是整個工作流系統設計的基礎，模型描述能力的強弱決定了系統所支持應用范圍以及系統的靈活度，工作流模型就是對業務過程的抽象表示。目前已有的建模方法主要有：基于活動網絡的建模方法、基于Petri網的建模方法、基于語言行為理論的建模方法、基于活動與狀態圖的建模方法和基于擴展事務模型的建模方法等，本系統我們采用基于UML的活動圖與狀態圖的建模方法。

在一個系統中，將應用邏輯中流程部分分離出來（稱之為流程邏輯），為流程邏輯建立模型，定義成基本活動對象。各個活動對象的工作流程如圖2所示。

2.3.2 流程運行

工作流引擎將分析當前的工作狀態，工作流活動對象的定義，根據業務的交互邏輯形成不同的工作流進程，搭建不同的業務平臺，即系統是以怎樣的流程運行的。圖2是系統整體活動對象的一般流程關系，如果一級稽核沒有通過，或是二級稽核沒通過那工作流引擎將如何工作，即系統是以怎樣的流程運行的，圖3是系統活動圖，工作流引擎將按此流程運行模型調用相應算法，引起工作流的正確轉向。

2.3.3 流程監控的定義和維護

流程監控是通過任務的啟動和終止的條件實現的，在本系統之中為每一個基本活動對象或稱任務都分配了一個相應的狀態位，根據形成的不同的業務流程，也形成了不同的狀態轉換過程。一個活動只有當啟動它的條件成立時，才會進行。

例如：一級稽核的狀態字為2，當系統檢測到狀態字現為2時，才可以啟動接受一級稽核活動，進而是二級稽核，同樣在進行歸檔時要檢測是否是已通過二級稽核的狀態。

流程維護包括六方面:基本信息錄入、待辦事務處理、退回業務處理、收回業務處理、流程察看、辦理人員處理。擬稿人進行基本信息的錄入，選擇處理人即此流程出現在處理人的待辦事務列表中，辦理人可以進行處理，處理的結果導致流程的分支有下一步、退回(至上一步)、收回(至擬稿人)。這里僅舉“待辦事務處理”模塊的過程如圖4 所示，其他類似。

3 結束語

基于工作流的聯通電子商務業務稽核系統充分利用了工作流技術的特點，對于打造集成化、統一化、高效化的辦公環境具有重要的意義。工作流技術雖已得到了較大的發展，然而仍存在許多的問題，其主要表現就是工作流技術及產品的龐雜，幾乎每個管理軟件和辦公軟件廠商都要接觸工作流，也都會弄一套自己的工作流標準和底層架構，因此工作流技術有待我們進一步的研究和推進。

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