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大宗家種品種很多都是從高到低一路下滑,且走動緩慢。勿用多論。其中最惹人眼的要數黨參,太子參。從幾十元甚至白元大關跌至三四十元,跌勢明顯。川芎、北沙參、防風、桔梗、丹參、當歸、麥冬等等都跌至幾近成本。只有為數不多的幾個品種逆勢而上。如浙貝、天麻、覆盆子無論什么情款,反正是價格在升高,非常惹人眼球。其根本原因,還是生產過剩,再加藥廠整頓使其雪上加霜,加速了其下滑的力度。這個情況怎么解決,只有等待時間來解決。值得大家注意的是,一些幾年效益低下。人們種植不積極的較小品種,如王不留、小茴香、高良姜、紫苑等品種或可有商機,以后種植需要觀察和適當種植。
二、野生品種逆勢而上,市場關注力度加大,價格逐步走高。
和家種品種形成鮮明對比的是野生資源(包括野生動物資源),由于其藥性充足特殊性,和其連年采挖資源逐年減少的事實,及其生長緩慢等原因,特別是近年人們采挖成本增高,采挖困難導致供需缺口加大,逐漸被人們關注,其價格或升或堅,基本是一路走高(也不排除有回落品種,但還是回旋上升趨勢)。這些品種有羌活、重樓、白芨、豬苓、野生動物有蜈蚣、水蛭、全蝎等等走勢強勁。還有東北野生品種,今年人們關注力度提高,如蒼術、赤芍、白鮮皮、威靈仙、白頭翁等,相對大宗家種品種來說,價格效益可觀。還需要指出的是一些野生草類品種,由于相對其他野生品價格低,人們采挖不積極,產量減少;或采挖后占用空間大,人們不愿意存放,庫存空虛。這樣的不起眼的品種或許有商機。
三、花類品種相對大宗家種品種來說價位較高,價格穩定。
花類品種屬食藥兩用品。近年來由于人們的保健意識增強,其用量有逐年上升態勢,這個事實還未被廣大群眾認識,市場供應量暫時處于一般水平。沒有和大宗藥材那樣一哄而上,所以市場表現為不松不緊,價格比家種藥材高,相對也穩定。
四、樹木皮類相對大宗家種品來說,價格呈緩慢上升趨勢。
一、中藥材資源與分布
(一)中藥材資源概述
我縣位于北山區,境內氣候溫和,雨量充沛,具有各種生物生長的良好環境,藥用動、植物資源十分豐富。傳統家栽的藥用植物有茯苓、山茱萸、天麻等十余種,大宗野生藥材281種,年產量約1200噸,總產值可達1900萬元。為了挖掘地方中藥材資源狀況,早在1986年,我縣在全縣范圍內開展了中藥資源普查,整理編寫了《縣中藥資源名錄》。本名錄中收載了148個科屬,藥用資源402種,品規472種,其中植物362種,動物35種,礦物2種,其他3種。每一品種按品名、地方名、來源、分布地區、生長環境、花果期、采收期、藥用部位、性味、功能等分別作了記載,基本摸清了我縣中藥材資源情況。資料和部分標本現存瑞福祥藥業有限責任公司。
80年代到90年代,據不完全統計,部分中藥材儲存量過百噸,如野生百部根和蒲公英2個品種、種植茯苓1個品種;儲存量上噸的中藥品種有野生的柴胡、虎杖、仙鶴草、連錢草、天花粉、何首烏、魚腥草、益母草、大血藤、銀花、骨碎補、天南星、五味子、石韋、白及、地膚子、合歡皮、墨旱蓮、山梔子、鉤藤、海金沙、野、續斷、僵蠶等24個品種;種植的山茱萸、天麻、丹參、白術、白芷、玄參、黃柏、杜仲、荊芥、枳殼、枳實、陳皮等13個品種。政府對發展中藥材產業高度重視,農民的積極性也非常高。同時原縣中藥材公司在80年代初90年代末,建立有地產藥材接收倉庫,收購藥材(各鄉鎮由供銷社代收購)總量達20多萬公斤。我縣中藥材遠銷三省,讓農民增收80多萬元,企業經濟效益明顯提高,中藥資源成為我縣農民經濟收入的一個組成部分,有的曾經成為一個鄉鎮乃至一些農戶的主導產業和主要收入。隨著時代的變遷、市場的變化和政策因素的影響,中藥資源的開發利用近于萎縮。目前,我縣原有的藥材種植基地全部荒廢,藥農基本轉產他業。
(二)特色(地道)中藥材資源分布狀況
我縣特色(地道)藥材資源豐富。主要產品有百部根、茯苓、杜仲、天麻、山茱萸,年產量分別為100噸、100噸、10噸、2噸、1噸。分布狀況:百部根和茯苓全縣主產,杜仲主產于茅坪場鎮青竹村(原為基地,約500畝),天麻主產于原望家鄉、原曉坪鄉和河口鄉,山茱萸主產于花林寺鎮、舊縣鎮、原望家鄉。其中茯苓、天麻曾被原省財貿工作隊確認為生產基地。
二、中藥材市場分析
(一)批發環節的分析(含收購環節)
目前,我縣有兩家中藥材批發企業即瑞福祥藥業有限責任公司和宜昌恒瑞醫藥有限責任公司。瑞福祥藥業有限責任公司經營中藥材品種達106種,本地品種為16種,年銷售量20000公斤;宜昌恒瑞醫藥有限責任公司僅17種,本地品種1種,年銷售量3719公斤。
我縣藥店共有43家,其中有35家經營中藥材和中藥飲片;醫療機構達216家。我們將中藥材用量較大的8家醫療機構2008年部分中藥材價格進行了比較。以下是8家醫療機構采購部分中藥材的價格.
從數據可以看出我縣的中藥材批發產業并未帶動全縣的中藥材生產。
(二)零售環節分析
我縣共有35家藥店經營中藥材,占全縣總藥店77.7%。部分藥店的中藥材和中藥飲片銷售收入占全店盈利的50%以上。
但因中藥材和中藥飲片屬于處方藥,大都需要醫師進行配伍才能發揮作用,所以零售環節沒有醫療機構使用中藥材多。
(三)醫療機構環節分析
上表是我縣2007年2家縣級醫院和6家鄉鎮衛生院中藥材和中藥飲片銷售情況。
受SARS疫情、甲型H1N1流感疫情的刺激,藥材銷售趨旺。在狙擊疫情的戰斗中,傳統中醫中藥發揮了重要作用。一度出現了哄搶中藥材的浪潮,給疲軟的藥材交易注入了活力,拉動了中藥材市場發展。但因近期的魚腥草注射劑、刺五加、茵梔黃注射液事件和近日的雙黃連注射液事件,中藥產業現出備受質疑的局面。
隨著人民生活水平的提高和保健意識的增強,特別是通過“非典”疫情,人們更多關注增強免疫力,補益類保健品需求旺盛,呈穩步上升之勢。
三、中藥材企業加工能力分析
(一)中藥飲片加工企業能力分析
我縣原中藥材公司于1988年創辦中藥飲片加工廠,廠房面積500平方米,主要設備有切藥機兩臺、干燥箱一臺、炒藥機一臺、煅爐一臺、粉藥機一臺、磨刀機一臺、電動篩一臺。從事中藥飲片加工12年。年加工飲片量約20噸。在行業內連續三年獲省優質飲片加工廠(89年—91年),飲片質量連續五年獲宜昌市中藥飲片質量評比第一名(89年—93年)。受市場影響和《中藥飲片生產質量管理規范》政策約束,致使我縣中藥飲片廠于2000年停產。
四、中藥材產業發展存在的問題
通過調查了解,我縣目前中藥材產業發展存在的問題有多方面原因,概括起來主要是“四無”:種植無秩序,產品無標準,流通無市場,加工無龍頭。主要表現在:
1、政府引導不夠。從調查情況來看,目前,全縣中藥材產業的發展狀況基本處于自生自滅、自我發展的狀態。從理論的角度考慮,市場調節盡管有市場調節的好處和優勢,但其發展節奏卻難以與全縣整體經濟發展水平協調一致。市場這只無形的手有其主導調節的威力,但總有鞭長莫及的時候。政府的調節也是市場經濟健康發展不可或缺的必要手段。在各地都為挖掘中藥材產業發展的巨大潛力大顯身手的時候,我們再采取任其自生自滅、自我發展的態度對待我縣中藥材產業的發展,勢必坐失良機。
2、種植技術水平不高。
在調查影響藥農種植藥材的問題中,技術問題在六成以上,尤其在技術指導和技術培訓上,調查農戶表現出強烈的欲望。超過四成的農戶認為生產條件改善對擴大種植中藥材至關重要。市場風險對擴大種植中藥材的影響在四成左右。在眾多的影響因素中,藥農集中反映的技術、生產條件改善、市場風險這三大類問題是影響中藥材種植業發展集約化、規模化的突出問題。
詳細分析藥農種植技術方面的問題,我們看到,無良種、無標準、對GAP茫然,憑感覺盲目種植,結果是產量上去了,價格下來了,市場反而縮小,形成典型的“劣幣驅逐良幣”的檸檬市場模型,這是我縣中藥材產業發展不能上水平的內在原因。
3、沒有有規模的市場。雖然各中藥材收購站、點的中藥材交易相對活躍,但沒有一個相對集中、有規模的、在全省有一定影響的中藥材市場,導致信息滯后、受制于人,沒有價格話語權、不能帶動農民種植和中藥材加工等諸多問題。因此,在我們的調查中發現,無論是專業人士還是一般農戶,無論是企業家還是公務員,一致地指向需要建立專門的中藥材交易市場。
4、中藥材加工企業缺乏帶動作用。我縣原中藥材公司因種種原因,已于2000年停產。大部分藥材仍以原料出售。多數中藥材收購戶,多以家庭作坊式組織生產,加工場所不合格,手段原始,工藝落后,有的還在超量使用硫磺熏蒸,產品質量難控制,給市場銷售埋下了隱患。
當然,我們特別列出突出的問題類型,并不是說其他類型的問題可以視而不見,如交通運輸不便、缺少專業技術型的自助組織、缺少龍頭企業的帶動、資金不足、專業大戶影響力不夠、種植基地沒有形成氣候等等,都會在發展過程中不斷上升為突出矛盾。
五、中藥及中藥產業的利用與前景
年10月10日,國務院了由科技部、國家計委、國家經貿委、衛生部、藥品監管局、知識產權局、中醫藥局、中科院聯合起草的《中藥現代化發展綱要(2002年至2010年)》,使我國中藥材現代化建立進入一個全新的歷史階段。
省委、省政府做出的《關于加快中醫藥事業發展的決定》。特別提出“重點支持等地建成集中藥材規范化種植、現代中藥研究、生產、商貿、信息交流為一體的中藥現代化科技產業基地,培育若干個產值過10億元的現代中藥產業集群”。明確提出“中醫藥產業對經濟發展的貢獻顯著增加”,并要求“逐步建成中醫藥強省”。
一系列的國家政策的實施和各地爭先恐后的態度和發展態勢,無疑都說明中醫藥產業將是生物技術應用最廣闊的領域,中醫藥產業發展的潛力巨大。中醫藥產業的發展不僅將成為各地高新技術產業增長的亮點,而且將成為各地產業升級的一個方向。
六、推進中藥材產業化發展的建議
結合我縣地產藥材的現狀和實際,建議:
1、中藥材收購由瑞福祥藥業有限責任公司根據實際,合理布局收購網點,指導農民按季節種植、采挖和粗加工。同時建立一個中藥材專業合作社或協會。
2、縣食品藥品監督管理局按照法律、法規的規定對全縣不具備資質的22家藥材收購站點加強監督檢查,規范市場。
3、建設幾個或一批符合GAP規范的且在全國具有突出地位的中藥材生產基地。
按照中藥材種植(養殖)標準規范,突出抓好山茱萸、茯苓、天麻省級和國家級規范化種植示范基地建設,進而發揮示范基地的示范帶動作用。同時積極發展市場需求量大、產地地道的丹參、白術、白芷、玄參、黃柏、杜仲、荊芥、枳殼、枳實、陳皮等,擴大市場占有率,提升縣在全省中藥材生產中的地位。
相關部門出臺系列政策鼓勵和引導農戶種植相關中藥材。
以“*重要思想和*精神為指導,進一步貫徹落實省委、省政府整頓和規范市場經濟秩序工作要求,切實實施食品藥品放心工程,按照省藥品監督管理局、省公安局、省政府糾風辦、省藥商行政管理局《江西省中藥材專業市場專項整治方案》的部署,以凈化中藥材專業市場為重點,嚴厲打擊制售假劣中藥材的違法犯罪活動,確保人民群眾用藥安全有效。
二、整治目標
堅決依法取締非法中藥材市場和集貿市場違法經營中藥飲片、中西成藥、毒性中藥材等違法行為,嚴厲查處藥品生產、經營企業及各級醫療結構從非法渠道購進中藥飲片的違法行為。通過有效整治和監管,使中藥材專業市場中不出現假劣藥品和違法經營,以中藥材專業市場的整治推動全市藥品市場秩序的全面規范。
三、整治重點
此次專項整治工作的重點是禁止在中藥材專業市場銷售中藥飲片、毒性中藥材、瀕危動植物中藥材和其他國家明確規定禁止在中藥材專業市場銷售的各類藥品,依法查處制售假劣中藥材的違法犯罪行為和從非法渠道購進中藥飲片的違法行為。
重點地區為樟樹市。
四、工作措施
1、加強對樟樹市中藥材專業市場的管理。樟樹市應建立中藥材專業市場監管責任制,要把中藥材專業市場納入企業登記管理范疇,明晰市場開辦者的法律責任,健全內部質量與經營管理體系;堅持中藥材專業市場實行封閉式管理,嚴禁以城市為市、以路為市、以街為市和中藥材市場無序發展、隨意遷址;不得以任何形式對中藥材專業市場中經營業戶發放任何形式的《藥品經營許可證》,已發放的要立即予以撤銷,無效的全部進行清量。
2、加大對中藥材監督檢查力度。對中藥材專業市場銷售各種中藥飲片、毒性中藥材、瀕危動植物中藥材及國家明確規定不得在中藥材專業市場銷售的各類藥品,一經發現一律按無《藥品經營許可證》或超范圍經營藥品進行查處;進一步加大對中藥材專業市場的中藥飲片抽檢力度,并結合國家藥監局、公安部聯合部署開展的打擊制售假劣藥品、醫療器械違法犯罪專項行動,對制售假劣飲片、中藥材、假劣藥品等各種違規違法行為的一定要依法查處,特別要嚴打制假團伙,深挖制假窩點。
3、加大綜合整治力度。對藥品生產、經營企業及各級醫療機構從中藥材專業市場及其它非法渠道購入中藥飲片的,一律按從無《藥品經營許可證》處采購藥品進行查處;對藥品生產、經營企業為中藥材專業市場經營業戶銷售禁止銷售的各類藥品提供企業票據的,一律依法進行查處;對在集貿市場違法經營中藥材的行為進行堅決打擊。
4、廣泛開展宣傳,調動社會各方面的積極因素,為整治中藥材專業市場創造條件,認真吸納合理建議,提高整治效果。
五、實施步驟和時間安排
第一階段為動員、組織、自查階段。9月底前完成。做好各部門動員、組織工作并制定專項整治方案,并根據當地的實際進行自查自糾和規范,樟樹市的整治方案報市藥品監督管理局。
第二階段為集中整治階段。10月。在前一階段工作的基礎上,圍繞此次專項整治工作重點,集中力量開展專項整治行動。
第三階段為檢查、驗收、總結階段。11月。市有關部門通過各種形式對各地整治情況進行檢查或配合省有關部門進行檢查,并迎接省有關部門組織的驗收;11月底進行專項整治工作總結。
六、工作要求
各地按照全省統一部署的要求,把開展中藥材專業市場專項整治作為當前整頓和規范市場經濟秩序工作的重點,作為實施食品藥品放心工程的一項重要內容,立即行動起來,切實抓緊抓好。專項整治工作要在地方黨委和政府的領導下進行。有關部門要依法行政,各司其職,密切配合,齊抓共管,形成整體合力。要切實加大對各類違規違法行為的查處力度,對銷售假劣藥品或達不到禁止銷售中藥飲片等整治要求的中藥材專業市場要限期停業整改,整改后仍達不到要求的,堅決予以關閉。對整治后問題依然嚴重,市場管理混亂,繼續出售假劣藥品藥材的,不僅要追究當事人的直接責任,還要追究監督管理部門主要領導。
關鍵詞:中藥材;品種名稱;混亂;糾正
中圖分類號:Rg82.5
文獻標識碼:B
文章編號:1007―2349(2007)05―0023―02
中藥材品種名稱混亂的問題,在我省藥材市場上一直存在,而且已經直接影響到中醫用藥的有效性和用藥的安全。主要混亂的品種是:滇威靈仙與威靈仙,土茯苓與金蕎麥,土茯苓與菝葜,土茯苓與粉(綿)革薜,昆明山海棠與雷公藤,兒茶不辨真偽。
1、滇威靈仙與威靈仙的混亂
滇威靈仙,又名小黑藥、草威靈、鐵腳威靈。為菊科植物顯脈旋復花(Inula nervosa Wall.)的根。生長于海拔600~2800m山坡林下、荒地或草叢中。全省各地均有分布。性味:辛、溫。功效:健胃消食,行氣止痛,祛風除濕。主治:風濕關節炎、腰腿痛、胃痛、納呆腹脹。以止痛、消食健胃、止汗為主要特點。民間常用于治療消化不良,脘腹脹痛和小兒多汗癥。
藥材性狀:根莖短柱狀長1~1.5cm,直徑1~1.5cm,有黃白色纖細毛。根黑色,長15~20 cm,直徑0.3~0.5cm,有較重的特殊芳香氣。
威靈仙,為毛茛科植物威靈仙(Clematis chinensisOsbeck)或同屬植物棉團鐵線蓮、東北鐵線蓮的根根莖,為習用的正品中藥。雖然我省亦有野生,但產量極少,主要以從省外調入使用。性味:辛、咸、溫。功效:祛風除濕,通絡止痛。主治:風濕痹痛、肢體麻木、筋脈拘攣、屈伸不利、骨哽咽喉。以祛風除濕,治療風濕痹痛為特點。
藥材性狀:根莖柱狀無毛,長1~10cm,直徑0.3~1.5cm,質地堅韌,斷面呈纖維性。根黑褐色木質化,細長15~30 cm,直徑0.1~0.3cm,氣微味淡或辛辣(東北鐵線蓮)。
滇威靈仙為我省習用地方藥物,除中藥大辭典以“草威靈”記載外,從未被國家藥典收載過。民間主要用于食積不化,胃脘脹痛的治療,或用其根皮研末蒸雞蛋或肉治療小兒疳積、多汗癥。而中藥威靈仙則是一味治療風濕痹證的常用之品,二者在臨床運用上有著一定的區別。但由于滇威靈仙也有一定的祛風濕止痛作用,加之市場價格較威靈仙便宜以及威靈仙供貨時有缺乏,所以上世紀七十年代后,藥材供應商常把滇威靈仙當威靈仙供給醫院,造成目前兩種藥品的使用混亂。
2、土茯苓與金蕎麥
土茯苓,為百合科攀援木質藤本植物光葉菝葜(Smilaxglabra Roxb)的根莖。生于海拔500~3000m左右的山地、林中或灌木叢,全省各地均有分布。性味:甘、淡、平。功效:除濕,解毒,通利關節。主治:濕熱淋濁、濕濁帶下、小便不利、瘰疬癰腫、梅毒、汞中毒等證兼肢體筋骨攣急疼痛癥。
藥材性狀:外觀呈不規則圓柱狀或條塊狀,上有明顯結節隆起和堅硬圓錐狀細根殘基。切面類白或淡粉色,折斷時粉塵飛揚。味微甘。
金蕎麥為蓼科多年生草本植物金蕎麥[Fagopyrumdibotys(D.Don)Hara.]生于海拔600~3500m的山坡、林緣、草地、路邊。全省各地均有分布。性味:澀、涼。功效:清熱解毒,祛痰,排膿。主治:肺膿瘍、支氣管擴張癥、扁桃體周圍膿腫、胃炎、胃潰瘍。
藥材性狀:帶瘤狀分枝的不規則團塊,表面棕褐色。斷面淡棕紅色,中央區紅色更深,有放射狀紋理。氣微味澀。
兩者本非同一物質,功效主治各異。而在藥材市場僅因金蕎麥有“土茯苓”的別名,而致品名混亂,把金蕎麥當土茯苓使用的情況已經成為目前我省中藥材市場的通病,從藥材市場購進的土茯苓,基本上都是金蕎麥,嚴重地影響了醫生的治療與療效。
3、錯把土茯苓當萆
粉萆(艸解)為薯蕷科草質藤本植物粉背薯蕷(Dioscorea hypoglauca Pslibin)的根莖。綿萆(艸解)為薯蕷科草質藤本植物綿革薜(D.septemloba Thunb)或福州薯蕷(D.futschauensis Uline ex R.Kunth)的根莖。
藥材性狀:以上不論何品種,其皆具有以下特點:外皮黃褐或棕褐色,分布稀疏須根殘基。切面質軟呈灰白或灰黃色,上有散在分布的纖維點狀管束,氣微味苦。
萆(艸解)性味苦、平。功效:利濕化濁,祛風除痹。主治淋病白濁、濕濁帶下、風濕痹痛、濕毒熱瘡。由于其含較高的薯蕷苷元成分,臨床使用具有很強的類似西醫可的松的抗炎效果,且長期服用沒有副作用。是中醫治療各種風濕、類風濕等免疫性疾病的有效藥物,而土茯苓這方面的效果則遠遠不及。而目前我省中藥材市場上,則二者混用,皆標為萆(艸解)名稱。凡從藥材市場購進的萆(艸解),既有薯蕷科的萆(艸解),也有百合科的土茯苓。這是中醫治療上述疾病時療效不穩定的主要原因。
4、菝葜被更名為紅茯苓
菝葜為百合科攀援藤本植物菝葜(Smilax china L)的根莖。性味:微苦、澀、平。功效主治與土茯苓大致相同。但因其薯蕷皂苷元含量高于土茯苓,故臨床運用偏于消除炎癥反應而具有較強的除濕止帶作用。
藥材性狀:表皮外觀與土茯苓相似但呈黃棕色或紫棕色,切面為黃棕或紅棕色,纖維性可見點狀纖維管束及多數小亮點。由于本品與土茯苓為同科屬植物,除色澤有別外,主治用法大體相同,所以民間習慣把菝葜稱為紅茯苓,土茯苓稱為白土茯苓。結果造成云南藥材市場上的又一品名混亂。
5、昆明山海棠與雷公藤混為一種
昆明山海棠又名紫金藤、掉毛草、六方藤、火把花。為衛矛科落葉攀援灌木植物昆明山海棠[Tripterygiumhypoglaueum(Levi)Hutch]的根及根皮。
[關鍵詞] 現場鑒別;分子鑒定;藥材
[收稿日期] 2012-12-03
[基金項目] 北京市科技專項“道地中藥材功能基因組研究北京市重點實驗室2012年階梯計劃項目”
[通信作者] *黃璐琦,E-mail: 中藥材基原真偽鑒別是中藥學研究領域中的重要研究方向和首要問題,中藥材是否“正本清源”直接影響到用藥安全。由于中藥材基原具有多樣性、復雜性的特點,易受到物種延續性、變異性、地域性和復雜性等因素的影響。因此,對中藥材基原鑒別可以從源頭上控制中藥的質量,對保障中藥生產和中藥產業的健康發展起到舉足輕重的作用[1]。利用分子生物學技術依據遺傳物質DNA在不同生物個體的差異鑒別生物物種,可為中藥材品種鑒別提供依據[2]。近20年間,以PCR技術為基礎的中藥分子鑒別技術因其不受外界環境的影響、具有較好的客觀性,逐漸被業內認可。其中烏梢蛇、蘄蛇分子鑒別方法被《中國藥典》(2010年版)收載。筆者認為,對中藥鑒定技術的需求不僅僅局限于實驗室應用,未來將更主要應用于廣泛的實際生產與貿易交流環節。隨著分子鑒別技術的發展,構建中藥材分子鑒別現場運用模塊系統有望實現在產地、藥市、藥房等進行藥材現場分子鑒別,將對中藥鑒定學科和中藥產業的可持續發展將起到推動作用。
1 中藥材分子鑒別現場運用的意義和需求
1.1 分子鑒別現場運用是常規檢測手段的延伸
對中藥材真偽品的檢測通常采用眼看、手摸、嘴嘗、鼻聞等方法,正確辨別藥材真偽品需要較高的專業技能和長時間經驗積累。目前能夠熟練掌握這一技能的人才缺乏,且面對種類繁多的中藥材,鑒定人員存在主觀判斷力差異,也影響鑒定的結果。分子鑒別現場運用可以在短時間內實現對藥材真偽品的檢測,且不受藥材外觀形態、個體大小和完整性的影響,有利于提高中藥材質量監管的科學性和管理效力。
1.2 高通量檢測是分子鑒別現場運用的重要優勢
在藥材抽檢的過程中,按照中藥材或中藥飲片抽驗工作程序,樣品數量巨大。發展高通量檢測技術是縮短檢測時間、減少工作量、節約檢測成本的重要途徑。
1.3 儀器設備簡單、成本低廉將有利于分子鑒別現場運用的推廣
近年來,許多學者利用分子生物學技術對中藥鑒定方法進行了廣泛的研究,并取得了豐富的成果。如楊俊寶等[3]篩選獲得2個RAPD引物,可以用于鑒別半夏和掌葉半夏。蔣超等[4]利用EST-SSR技術對金銀花、山銀花進行了鑒別方法的研究。DNA條形碼技術也被認為是中藥鑒別的重要方法之一[5]。荊志偉等[6]用基因芯片技術對中藥石斛的不同種屬進行了鑒別研究,將16個不同種屬石斛的ITS序列固定在玻片上制作了基因芯片,用于其中5種石斛的鑒定。然而這些方法目前僅止于實驗室階段,由于其操作繁瑣、檢測需要大型儀器、耗時長、成本高,難以實現在產地、藥市、藥房等進行現場鑒別,極大的限制了分子鑒別技術的使用范圍和推廣程度。
在日常監督工作中對于廉價藥材的檢測或者對技術較復雜、操作過程繁瑣的檢測指標進行大批量樣品篩檢時,往往面臨時間和經費的雙重困難。利用分子鑒別現場運用系統有望有效解決這一難題。
1.4 在有毒中藥、珍稀瀕危藥材、貴重藥材鑒別方面具有廣闊的發展潛力
分子鑒別現場運用系統,對藥材需求量少,僅需0.1 g藥材就可以進行鑒別反應。因此,對于一些價格昂貴或珍稀瀕危的藥材,該系統具有更廣闊的發展潛力。
1.5 中藥材快速檢測工作模式的探討
將快速檢測車及現場快速檢測儀器作為主要工作平臺,依托快檢實驗室開展工作。形成涵蓋現場快速檢測的藥材分子快速檢測模式。現場采集的樣本可以通過快速檢測儀器獲得結果,如需實驗室檢測或需進一步確證,則將樣品送回快檢實驗室獲得檢測結果。
2 中藥材分子鑒別現場運用存在的困難及解決方案
2.1 中藥材DNA快速提取
CTAB法、SDS法等[7]是中藥材DNA提取的常用方法,在這些方法中常使用65 ℃水浴使細胞裂解、蛋白質變性,從而使DNA被釋放出來,水浴時間一般為30 min至2 h,這很難滿足中藥材分子鑒別現場運用的需求。本課題組開發了一種基于堿裂解法的中藥材DNA快速提取方法,并申請發明專利,在此基礎上研制了中藥材DNA快速提取試劑盒。試劑盒中主要包括溶液A和B。簡要操作過程:將藥材粉末加入溶液A后震蕩1 min,再加入溶液B震蕩1 min,靜置后取上清待用。筆者利用這種方法對市售的180余種藥材包括果實類、種子類、花類、全草類、皮類、根類藥材及炮制品進行了DNA提取,并選擇葉綠體psbA-trnH序列通用引物進行PCR反應及瓊脂糖凝膠電泳檢測,結果表明85%藥材DNA獲得了PCR擴增條帶,其中花類、果實種子類及動物類藥材DNA獲得了100%的PCR成功率,但炮制過的藥材PCR成功率明顯降低。
2.2 藥材真偽鑒別DNA標記的開發及其快速檢測
獲取藥材正品及其市場常見混淆品的核酸信息,并利用生物信息學分析軟件對相關序列進行分析,篩選藥材真偽鑒別DNA標記,收集不同產地、不同批次的藥材正品及其混淆品樣品,對真偽鑒別DNA標記進行驗證。RAPD,RFLP,ISSR,DNA條形碼等DNA標記已被用于中藥材的真偽鑒別[8],但這些鑒別DNA標記檢測的方法大多以PCR技術為基礎,熒光定量法[9]、測序法、限制性內切酶酶切法[10]、質譜法[11]、基因芯片[6]等方法也被用于鑒別標記的檢測。但這些方法大多操作復雜、價格昂貴、檢測時間長,而且需要大型的儀器設備,因此并不適合于現場鑒別。
單核苷酸多態性SNP(single nucleotide polymorphisms)作為新一代的分子標記,具有數量多、覆蓋密度大、遺傳穩定性強、多態性豐富的優勢,且由于SNPs一般只有2個等位基因,在檢測時只需要通過一個簡單的“+/-”方式即可進行基因分型,使得其檢測易于實現自動化[12]。基于SNP標記,在病原微生物檢測、疾病診斷等研究中陸續開發了一些可用于現場快速鑒別的技術,簡化了對儀器和實驗室條件的要求、縮短了檢測時間,具有很好的發展前景。如等溫擴增技術,包括Q復制酶反應(QBRA)、鏈置換擴增技術(SDA)、切口酶恒溫擴增技術(NEMA)、轉錄依賴的擴增技術(TASTMA,3SR,NASBA)、解旋酶擴增技術(HAD)、滾環擴增技術(RCA)、環介導等溫擴增技術(LAMP)、單引物等溫擴增技術(SPIA)等[13-14],為中藥材現場鑒別中的鑒別DNA標記快速檢測試劑盒開發提供了思路。
3 研究實例
3.1 中藥材分子鑒別現場運用的整體方案
從實際出發,基于藥材真偽鑒別DNA標記,設計了一套用于中藥材分子現場鑒別的模塊系統(圖1),包括藥材DNA快速提取模塊、藥材鑒別DNA標記檢測模塊和保障模塊。
圖1 中藥材分子鑒別現場運用模塊系統組成
Fig.1 A module system for the scene application of molecular identification in Chinese medicine materials
3.1.1 藥材DNA快速提取模塊 包括①手持式研磨儀。配置鋰電池,適合野外使用。②中藥材DNA快速提取試劑盒,包括溶液A和B,常溫保存。
3.1.2 藥材鑒別DNA標記檢測模塊 包括①微型金屬加熱槽。配置鋰電池或車載電源,可用于(65±5) ℃ DNA擴增反應。②便攜式紫外燈。配置鋰電池,適合野外使用,用于熒光檢測,配備小型暗箱。③鑒別DNA標記的快速檢測試劑盒。
3.1.3 保障模塊 包括①微量移液器。②微量離心管。③吸頭、吸頭盒。④鋒利的剪刀。⑤低溫保藏盒,用于儲存DNA聚合酶,配置冰袋。
現場鑒別模塊系統擁有完善和簡單的操作流程,操作時間控制在40~60 min,儀器裝置簡單、成本低,操作人員無需掌握較好的專業知識,經過簡單訓練即可進行中藥材快速鑒別。
3.2 金銀花分子鑒別現場運用研究
3.2.1 金銀花真偽鑒別DNA標記的開發 通過對GenBank收錄的忍冬屬植物葉綠體 trn L-trn F序列進行對比分析,獲得金銀花真偽鑒別SNP位點,并依據該SNP位點設計特異性引物,對84份金銀花基原植物及其市售飲片、混淆品進行雙向位點特異性PCR擴增,根據真偽品的特異性條帶進行金銀花藥材鑒別,確定了金銀花真偽鑒別SNP[15]。
3.2.2 鑒別DNA標記的快速檢測技術 利用已獲得的金銀花真偽鑒別SNP,開發了一種改良LAMP技術,通過設計特異性引物,于65 ℃在DNA聚合酶的作用下進行擴增反應。反應產物加入適量的SYBR Green染料,在紫外燈下進行檢測,正品樣本即可檢測產生熒光,混淆品樣品則不產生熒光。在此基礎上開發了金銀花鑒別DNA標記快速檢測試劑盒。包括溶液C.緩沖液(常溫保存);溶液D1-4.特異性引物(常溫保存);溶液E.DNA聚合酶(低溫保存);溶液F.SYBR Green染料(常溫保存);溶液G.正對照;溶液H.負對照。
3.2.3 金銀花分子鑒別現場運用操作規程 ①用剪刀剪碎藥材,取少量樣品用手持式研磨儀磨成粉末。②取少量粉末放置于2 mL離心管中,使用中藥材DNA快速提取試劑盒進行DNA提取。③使用鑒別DNA標記快速檢測試劑盒進行藥材的真偽檢測。依次在0.2 mL離心管中加入溶液C,溶液D,2 μL DNA提取液,溶液E,放置于微型金屬加熱槽中,在65 ℃條件下進行DNA擴增反應。反應30 min后,冷卻至室溫。加入溶液F,混勻后在紫外燈下進行檢測。實驗設置正、負對照。④判定標準:產生熒光即為正品樣本,不產生熒光則為混淆品樣品。
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Strategy and practice on scene application of molecular identification in
Chinese medicine materials
YUAN Yuan, JIANG Chao, HUANG Lu-qi*
(National Resource Center for Chinese Materia Medica, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China)
[Abstract] Accurate and fast identification of Chinese medicine materials has been more difficult work during production and trade. However the molecular identification at present was only used in the laboratory, and difficult to scene application in producing area, market and pharmacy that limited its usage greatly. There are two important technologic bottlenecks for scene application: DNA rapid extraction and fast detection of DNA markers. This study developed a module system for the scene application of molecular identification in Chinese medicine materials.