醋酸棉酚對(duì)鼠生育能力影響

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【摘要】目的探索醋酸棉酚對(duì)雄鼠生殖系統(tǒng)的影響，為生態(tài)滅鼠藥的研制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法將雄性小鼠隨機(jī)分成對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組10只，通過灌胃的方法，對(duì)照組灌生理鹽水，實(shí)驗(yàn)組按50、120、200mg/kg體質(zhì)量濃度灌胃，分別于灌胃10d、20d后解剖，取睪丸、附睪，進(jìn)行精子細(xì)胞觀察、精子計(jì)數(shù)、精子活率和精子形態(tài)觀察，如指標(biāo)有變化，進(jìn)行交配試驗(yàn)檢測(cè)醋酸棉酚對(duì)小鼠生育能力的影響。結(jié)果灌胃10d各指標(biāo)組間差異均無顯著性；20d后，200mg/kg組與對(duì)照組精子數(shù)目和睪丸系數(shù)變化差異有顯著性（P<0.05），睪丸切片可見120mg/kg和200mg/kg組生精小管的初級(jí)精母細(xì)胞與精原細(xì)胞或基膜之間有較大的空隙，部分生精小管腔內(nèi)的精子尾部減少。合籠后產(chǎn)子數(shù)量和懷孕率對(duì)照組與120mg/kg組和200mg/kg組差異有顯著性（P<0.05），120mg/kg組和200mg/kg組間差異無顯著性（P>0.05）。結(jié)論醋酸棉酚對(duì)雄鼠生殖系統(tǒng)的影響可能與其濃度和藥物作用的時(shí)間有關(guān)。50mg/kg組在20d內(nèi)對(duì)小白鼠生育能力沒有影響，120mg/kg和200mg/kg組在20d內(nèi)對(duì)小白鼠生育能力有影響。

【關(guān)鍵詞】醋酸棉酚；避孕藥；生殖系統(tǒng)

Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectofgossypolacetateonreproductivesystemsofmalemice,providingusefuldatafordevelopmentofenvironmentfriendlyratpoison.MethodsMalemicewererandomlyassignedintotwogroups,with10miceineachgroup.Miceincontrolgroupwereadministeredintragastricallywiththephysiologicalsaline,andmiceintheexperimentalgroupswereadministeredintragastricallywithgossypolacetateatthedoseof50,120,200mg/kg.Epididymisweretakentoobservethespermcounts,motilityrateandthespermshapeafter10daysand20daysrespectively.Inthecasethatdiversifiedparameterswereobserved,matingtestwasconductedtodetecttheeffectsofgossypolacetateonfertilityofmalemice.ResultsTherewerenostatisticssignificancebetweentheexperimentalgroupandcontrolgroupafter10days,however,spermcountsandtesticle/bodyweightindiceshadstatisticssignificance(P<0.05)after20days.Thurdermore,therewerevisibledifferencebetweenthegroupsadministeredwithgossypolacetateatthedosesof120,200mg/kgandthecontrolgroupintesticlesectionobservationwithmicroscopy.Afterhavingthebirthabilitytest,numberofbabymouseandpregnancyrateshavestatisticsignificanceinthegroupsadministeredwithgossypolacetateatthedosesof120and200mg/kggroups.ConclusionsTheeffectofgossypolacetatewaspossiblyconcernedwithitsconcentrationandtheadministrationtime.Therewasnoeffectinthegroupadministeredwithgossypolacetateatthedoseof50mg/kgin20days,butnotinthegroupadministeredwithgossypolacetateatthedosesof120mg/kgand200mg/kg.

Keywords:gossypolacetate;contraceptive;reproductivesystem

隨著全球?qū)Νh(huán)保的日益關(guān)注，人們?cè)跍缡罄砟钌祥_始發(fā)生明顯的轉(zhuǎn)變，從殺死個(gè)體向控制種群和降低種群數(shù)量的角度轉(zhuǎn)變，積極尋找、開發(fā)用于鼠類防治的抗生育劑是目前研究的新方向。醋酸棉酚是人類曾經(jīng)廣泛應(yīng)用的男性避孕藥。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,棉酚藥理作用機(jī)制是通過破壞雄性睪丸細(xì)精管的生精上皮細(xì)胞,從而導(dǎo)致精子數(shù)量的減少,直至無精子產(chǎn)生,停藥后可恢復(fù)［1］。本研究利用醋酸棉酚的抗生育作用進(jìn)行生態(tài)滅鼠藥的研制。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物5周齡昆明小鼠，普通級(jí)，合格證號(hào):SCXK(粵)20030002，粵監(jiān)證字2006A017，28～30g，雄性40只，雌性80只，購于廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.1.2藥品復(fù)方醋酸棉酚片，每片含醋酸棉酚20mg，國藥準(zhǔn)字H61022557，20mg×3片×150盒。

1.1.3其他實(shí)驗(yàn)用品經(jīng)高壓滅菌的生理鹽水，95％乙醇，10％甲醛，0.5％伊紅染液，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，細(xì)胞計(jì)數(shù)器，電子天平，解剖工具及灌胃工具等。

1.2方法

1.2.1分組購回的小鼠正常飼養(yǎng)1周以適應(yīng)實(shí)驗(yàn)的環(huán)境。1周后，實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分到實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，其中實(shí)驗(yàn)組分為3個(gè)體質(zhì)量濃度分別為200mg/kg，120mg/kg，50mg/kg，每組10只。

1.2.2灌胃實(shí)驗(yàn)灌胃前稱出平均體質(zhì)量，對(duì)照組灌生理鹽水，實(shí)驗(yàn)組灌50mg/kg,120mg/kg，200mg/kg體質(zhì)量濃度的醋酸棉酚混懸液，1周平均灌4次，每次0.3mL，灌胃期間喂給正常飼料和水。分別于灌胃10d、20d后，從每組隨機(jī)抽出4只小鼠脫臼處死，取睪丸和附睪，進(jìn)行觀察。

1.2.3附睪標(biāo)本的制備頸椎脫臼法處死小鼠，取出兩側(cè)附睪，放入盛有1mL生理鹽水的小燒杯中，用眼科剪將附睪縱向剪1～2刀，靜止3～5min，輕輕搖動(dòng)，用四層擦鏡紙過濾。觀察精子活率［2］、精子計(jì)數(shù)（1000/精子計(jì)數(shù)）［2］、精子形態(tài)、精子細(xì)胞［3］等指標(biāo)。

1.2.4睪丸切片的制備稱出睪丸質(zhì)量，將新鮮的睪丸標(biāo)本放在φ=10％的甲醛中保存。制作切片時(shí)，先將標(biāo)本于自來水沖洗30min以上，再進(jìn)行脫水、包埋、固定、切片、脫蠟、最后用HE染色。觀察睪丸系數(shù)（睪丸質(zhì)量/體質(zhì)量）［4］和病理組織學(xué)變化。

1.2.5交配試驗(yàn)在灌胃20d后，每組隨機(jī)抽出4只雄鼠，進(jìn)行合籠交配，期間喂給正常飼料和水。在合籠20d后處死雌鼠，記錄懷孕鼠數(shù)及孕鼠平均胎數(shù)。

【摘要】目的探索醋酸棉酚對(duì)雄鼠生殖系統(tǒng)的影響，為生態(tài)滅鼠藥的研制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法將雄性小鼠隨機(jī)分成對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組10只，通過灌胃的方法，對(duì)照組灌生理鹽水，實(shí)驗(yàn)組按50、120、200mg/kg體質(zhì)量濃度灌胃，分別于灌胃10d、20d后解剖，取睪丸、附睪，進(jìn)行精子細(xì)胞觀察、精子計(jì)數(shù)、精子活率和精子形態(tài)觀察，如指標(biāo)有變化，進(jìn)行交配試驗(yàn)檢測(cè)醋酸棉酚對(duì)小鼠生育能力的影響。結(jié)果灌胃10d各指標(biāo)組間差異均無顯著性；20d后，200mg/kg組與對(duì)照組精子數(shù)目和睪丸系數(shù)變化差異有顯著性（P<0.05），睪丸切片可見120mg/kg和200mg/kg組生精小管的初級(jí)精母細(xì)胞與精原細(xì)胞或基膜之間有較大的空隙，部分生精小管腔內(nèi)的精子尾部減少。合籠后產(chǎn)子數(shù)量和懷孕率對(duì)照組與120mg/kg組和200mg/kg組差異有顯著性（P<0.05），120mg/kg組和200mg/kg組間差異無顯著性（P>0.05）。結(jié)論醋酸棉酚對(duì)雄鼠生殖系統(tǒng)的影響可能與其濃度和藥物作用的時(shí)間有關(guān)。50mg/kg組在20d內(nèi)對(duì)小白鼠生育能力沒有影響，120mg/kg和200mg/kg組在20d內(nèi)對(duì)小白鼠生育能力有影響。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,采用方差分析,以P<0.05為差異有顯著性。

2結(jié)果

2.1觀察指標(biāo)單因素方差分析灌胃20d后，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組精子數(shù)目、睪丸系數(shù)變化差異有顯著性。為了進(jìn)一步了解方差分析差異的來源，兩兩比較結(jié)果顯示精子數(shù)目、睪丸系數(shù)經(jīng)過方差齊性檢驗(yàn)，方差齊性（P=0.214；P=0.680）。選用TukeyHSD得200mg/kg組精子數(shù)目和睪丸系數(shù)與對(duì)照組比較差異有顯著性（P<0.05），見表1。

2.2交配試驗(yàn)

經(jīng)非參數(shù)檢驗(yàn)，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)子數(shù)量和懷孕率的差異有顯著性。經(jīng)兩兩比較，懷孕率對(duì)照組與120、200mg/kg組差異均有顯著性（P=0.015和0.017），對(duì)照組與50mg/kg差異無顯著性（P=0.148），120mg/kg組和200mg/kg組差異無無顯著性（P>0.05）；產(chǎn)子數(shù)量對(duì)照組與120mg/kg、200mg/kg組差異有顯著性（P=0.026,0.076）；50mg/kg差異無顯著性（P=1.000），120mg/kg組和200mg/kg組差異無顯著性（P>0.05）,見表2，3。

表1灌胃20d后單因素方差分析表略

表2對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組孕鼠的產(chǎn)子數(shù)量比較略

表3對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組懷孕率比較略

2.3睪丸切片觀察

高倍鏡下觀察，NS組可見許多生精小管整齊的排列，各期精子細(xì)胞層次分明。間質(zhì)細(xì)胞清晰可見，許多精原細(xì)胞緊貼于基膜上，可見許多染成粉紅色的精子尾部游離于腔內(nèi)。

120mg/kg和200mg/kg灌胃組灌胃20d后，睪丸切片可見：部分生精小管排列較疏松，有些間質(zhì)細(xì)胞消失，部分生精小管內(nèi)基膜上的精原細(xì)胞較少，可見一些生精小管的初級(jí)精母細(xì)胞與精原細(xì)胞或基膜之間有較大的空隙，亦有部分生精小管腔內(nèi)的精子尾部減少。50mg/kg組未見異常，見圖1。

圖1小鼠睪丸切片(略)

3討論

3.1醋酸棉酚可致小鼠精子數(shù)目下降

棉酚的避孕原理是鼠類取食后，抑精作用通過對(duì)各級(jí)生殖細(xì)胞續(xù)貫作用的結(jié)果，使鼠類不能生成成熟的精子而不育，達(dá)到降低鼠類種群數(shù)量、減少鼠害的目的。大量研究證明，棉酚可抑制大鼠和人精子的數(shù)目、活率和活力［5］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示醋酸棉酚對(duì)雄性小鼠精子數(shù)目和睪丸系數(shù)組間差異有顯著性，提示灌200mg/kg體質(zhì)量濃度的醋酸棉酚后，20d小鼠的精子數(shù)目減少，初步顯示了棉酚的抗生育作用。

3.2醋酸棉酚可致小鼠睪丸發(fā)生病理改變

本次睪丸切片可以看出，與生理鹽水組比較，120mg/kg體質(zhì)量濃度已經(jīng)發(fā)生生精小管內(nèi)的精子細(xì)胞排列較疏松，少數(shù)腔內(nèi)精子尾部減少，且精原細(xì)胞與初級(jí)精母細(xì)胞間有斷層（出現(xiàn)較大空隙）。與孔佑華等［6］的研究結(jié)果一致。

3.3醋酸棉酚可致小鼠生育能力下降

在精子數(shù)目和睪丸系數(shù)發(fā)生變化的基礎(chǔ)上，進(jìn)行交配試驗(yàn)結(jié)果提示，醋酸棉酚可影響雌鼠懷孕率，降低雌鼠懷孕的幾率，且影響懷孕鼠的胎數(shù)。本研究顯示雄性小鼠用120mg/kg醋酸棉酚灌胃20d后，生育能力降低。

綜上所述，醋酸棉酚可影響雄鼠的精子數(shù)目前使睪丸發(fā)生一定程度的病理改變，其作用的程度可能與藥物的濃度及藥物作用持續(xù)時(shí)間有關(guān)，120mg/kg組20d可影響小鼠生育能力。要達(dá)到滅鼠效果，還需要進(jìn)一步進(jìn)行更接近鼠類生活習(xí)慣的喂食對(duì)生育能力影響的研究。

致謝:本次實(shí)驗(yàn)得到李宇聰、張麗銀、鄧家艷、周文、汪潔、李宇政、廖少平、鐘偉苑、曾雪紅等同學(xué)的幫助，特此致謝。

【參考文獻(xiàn)】

［1］曹堅(jiān),費(fèi)仁仁,趙躍華,等.服用低劑量醋酸棉酚對(duì)正常男性精子堿性核蛋白的影響［J］.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào),2000,22(3):220-222.

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［3］組織與胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)［M］.北京：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2000，64.

［4］王心如.毒理學(xué)基礎(chǔ)［M］.4版.人民衛(wèi)生出版社，2003:119.

［5］全國男性節(jié)育藥協(xié)作組.棉酚——一種新的男性抗生育制劑［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，1978,4:417.

［6］孔佑華,王鳳琴,張金萍,等.棉酚對(duì)小鼠睪丸生精細(xì)胞凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究［J］.濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2003,3:42.