抑癌基因PTEN
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【關鍵詞】PTEN;,環氧化酶
［摘要］目的：通過檢測抑癌基因pten和環氧化酶2(COX2)在大腸癌中的表達，探討其在大腸癌中的意義。方法：應用SP法免疫組化方法檢測10例正常大腸黏膜、80例大腸癌組織中PTEN和COX2的表達。結果：正常大腸黏膜中PTEN為強陽性表達，在大腸癌中有41.2%為陰性或弱陽性表達，明顯低于正常組(P<0.01)；COX2在正常大腸黏膜中80%為陰性表達，而在大腸癌中陽性率為72.5%，顯著高于正常組的表達(P<0.01)；在大腸癌中PTEN和COX2存在負相關(P<0.05)。結論：抑癌基因PTEN和COX2在大腸癌的發生發展過程中起著重要的作用。
［關鍵詞］PTEN;環氧化酶2;大腸癌
ExpressionandSignificanceofTumorSuppressorGenePTENandCyclooxygenase2inColorectalCancer
Abstract:ObjectiveTodetecttheexpressionoftumorsuppressorgenePTENandcyclooxygenase2(COX2)incolorectalcancer，andanalyzetheirsignificance.MethodsSPimmunohistochemicalmethodwasusedtodetecttheexpressionofPTENandCOX2in10casesofnormalcolorectalmembraneand80casesofcolorectalcancer.ResultsTheexpressionofPTENinallofthenormalcolorectalmembranewerepositive，andexpressionofPTENin41.2%casesofcolorectalcancerwerelowornegative，whichwasmuchlowerthanthenormalgroup(P<0.01).ThenegativerateofCOX2innormalgroupwas80%，whileincolorectalcancer，thepositiveratewas72.5%，whichwassignificantlyhigherthannormalgroup(P<0.01).AnegativecorrelationwasobservedbetweentheexpressionofPTENandCOX2.ConclusionOurdatasuggestthatPTENandCOX2playanimportantroleinthedevelopmentofcolorectalcancer.
Keywords:PTEN;COX2;Colorectalcarcinoma
大腸癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，對其癌變的機制一直是研究的熱點。抑癌基因與張力蛋白同源10q丟失的磷酸酶基因(Phosphataseandtensinhomologydeletedonchromosome10，PTEN)與各種腫瘤的發生、發展密切相關，在大腸癌也發現有PTEN基因表達的異常。環氧化酶2(Cyclooxygenase2，COX2)在很多腫瘤中呈高表達并與腫瘤的形成密切相關，但其作用機制尚不清楚。本文擬通過檢測大腸癌中PTEN和COX2的表達情況，并探討兩者之間的相關關系。
1材料和方法
1.1標本來源收集廣東醫學院附屬醫院1996年至2004年間大腸手術及活檢標本共90例(患者術前均未接受過化療、放療)，其中正常大腸黏膜10例，大腸癌80例，其中高分化30例，中分化27例，低分化23例，35例伴淋巴結轉移。所有標本均用10％甲醛液固定，常規石蠟包埋，4μm連續切片，并經HE染色后由病理學專家確診。
1.2主要試劑鼠抗人PTEN單抗(工作型)、兔抗人COX2(濃縮型，工作濃度為1∶100)、SP免疫組化試劑盒及DAB顯色液均購自北京中山生物技術有限公司。
1.3實驗方法所有標本均經甲醛液固定，常規石蠟包埋，4μm連續切片，常規脫蠟、梯度酒精水化至水，微波修復，自然冷卻至室溫。采用SP法免疫組織化學染色，DAB顯色3min～5min，蘇木素復染5min，鹽酸酒精分化數秒，流水返藍15min，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。用PBS代替一抗作為空白對照，已知陽性片作陽性對照。在光學顯微鏡下進行觀察。
1.4免疫組化結果判定PTEN及COX2陽性均定位于胞漿及胞膜，呈黃色或棕黃色顆粒。采用雙盲法統計實驗結果。隨機選取10個高倍視野進行計數，計數陽性細胞所占的百分比，根據陽性細胞的比例分為以下四個等級：<5％為陰性(-)，5％～25％為弱陽性(＋)，26％～50％為陽性(++)，>50％為強陽性(+++)。
1.5統計分析采用SPSS12.0統計軟件包進行統計，率的比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman等級相關分析，檢驗水準取雙側α=0.05。
2結果
2.1PTEN在大腸癌中的表達情況，見表1。
表1大腸癌中PTEN的表達（略）
注：與正常組相比，P<0.05
PTEN在正常大腸黏膜中均為強陽性表達，而在大腸癌中有33例PTEN蛋白表達缺乏(陰性組)或減少(弱陽性組)，占41.2％，顯著低于其在正常大腸黏膜中的表達(χ2=20.911，P=0.000<0.01)。同時PTEN與大腸癌的分化程度差異無統計學意義(χ2=4.649，P=0.590>0.05)。
2.2COX2在大腸癌中的表達情況，見表2。
表2COX2在大腸癌中的表達情況（略）
*注：與正常組相比，P<0.05。
COX2在正常大腸黏膜中主要以陰性表達為主，占80％(8/10)，在大腸癌中的陽性率為72.5％(58/80)，顯著高于其在正常大腸黏膜中的表達(χ2=13.163，P=0.004<0.01)。同時COX2與大腸癌的分化程度差異無統計學意義(χ2=3.890，P=0.692>0.05)。
2.3PTEN、COX2與大腸癌轉移的關系無淋巴結轉移的大腸癌中PTEN陽性表達率為86.7％(39/45)，而有轉移的陽性表達率為74.3％(26/35)，低于前者(χ2=8.082，P=0.044<0.05)。COX2在無淋巴結轉移組中的陽率為64.4％(29/45)，有轉移的陽性率為82.9％(29/35)，與前者相比差異有統計學意義(χ2=8.003，P=0.046<0.05)。見表3。
表3PTEN、COX2與大腸癌轉移的關系（略）
*注：與無轉移組相比，P<0.05
2.4大腸癌中PTEN與COX2的相關性經spearman等級相關分析，在大腸癌中PTEN與COX2呈負相關(相關系數r=-0.215，P=0.042<0.05)。
3討論
PTEN基因定位于10q23.3，編碼由403個氨基酸組成的蛋白［1］。研究表明該蛋白具有脂質磷酸酶和蛋白磷酸酶的雙重活性，可使第二信使PIP3去磷酸化，阻斷其下游Akt激酶的活化，進而阻斷相應的信號傳導系統，從而抑制細胞的生長［2］。PTEN與多種類型惡性腫瘤的發生和發展密切相關，本研究發現PTEN在正常大腸黏膜中均為強陽性表達，而在大腸癌中陰性和弱陽性表達的占41.2%，與正常組相比差異有顯著統計學意義(P<0.01)，表明PTEN在大腸癌中表達下調，這與大多數學者的研究相一致［3，4］，提示PTEN在大腸癌的發生和發展過程中起著重要的作用。本研究結果還發現PTEN的表達與淋巴結是否轉移有關，有淋巴結轉移組的PTEN陽性率低于無轉移組，表明PTEN蛋白陰性的腫瘤更具轉移性。但陳小巖［5］等的研究表明PTEN的表達與淋巴結的轉移無關，提示還要作進一步的研究來揭示PTEN與大腸癌轉移的關系。環氧化酶是催化前列腺素樣物質合成的關鍵酶，由COX1和COX2組成，其中COX1在正常組織恒定表達，主要功能是調節細胞的正常生理活動，保持內環境的相對穩定，而COX2在正常組織中幾乎不表達，但可被生長因子、細胞因子、腫瘤促進子等誘導表達，并可刺激腫瘤生長、轉移和浸潤等［6］，也是研究的熱點。本研究結果表明COX2在正常組織中只有兩例表現為弱陽性，其余皆為陰性表達；而在大腸癌組織中陽性率為72.5%，顯著高于正常組的表達。同時還發現有淋巴結轉移組的COX2陽性率高于無轉移組，表明COX2在大腸癌的發生和轉移過程中起著一定的作用，這與大多數學者的研究一致［7，8］，本研究結果還表明在大腸癌中PTEN的表達與COX2的表達呈負相關，即PTEN蛋白表達高的組織其COX2的表達較低，而PTEN蛋白表達下調的組織中COX2表達較高。Germain［9］等的研究表明在PTEN突變的細胞系中，Akt的磷酸化水平較高的細胞中COX2表達也較高，轉染能抑制Akt磷酸化的載體后可導致COX2表達下調，而轉染了能激活Akt激酶的載體后COX2表達上調，提示Akt信號通路可調節COX2的表達，而PTEN可通過調控Akt的表達而影響COX2的表達，從而引起相應的細胞增生或凋亡。而Honio［10］等認為COX2可通過調節PTEN和Akt來抑制由Fas介導的細胞凋亡。究竟是PTEN調控COX2還是COX2調控PTEN，具體的作用機制還有待進一步的研究。
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