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          心肌康顆粒黃芪甲苷含量測定

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          【摘要】目的建立高效液相-蒸發光散射檢測法測定心肌康顆粒黃芪甲苷的含量。方法采用色譜柱:KromasilODSC18(5μm,150mm×4.6mm),流動相:乙腈-水(32:68),流速:2.6ml/min。結果黃芪甲苷在1.8792~18.7920μg之間呈良好的線性關系,回收率為96.7%(RSD=1.68%)。結論方法簡便,結果準確,重現性好,可作為該制劑的質量控制指標。

          【關鍵詞】黃芪甲苷;高效液相色譜;蒸發光散射檢測法

          【Abstract】ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofastragalosideIVinXinjikanggranulesbyhighperformanceliquidchromatographywithevaporativelightscatteringdetection(HPLC-ELSD).MethodsThedeterminationwascarriedoutonaKromasilODSC18(150mm×4.6mm,5μm)withmobilephaseofacetonitrile-water(32:68).Theflowratewas2.6ml/min.ResultsTherewasagoodlinearrelationshipintherangeof1.8792~18.7920μg.Theaveragerecoverywas96.7%withRSD1.68%.ConelusionThemethodissimple,highlyrepeatableandaccurate,anditcanbeusedtocontrolthequalityofthepreparation.

          【Keywords】astragalosideIV;HPLC;ELSD

          心肌康顆粒由黃芪、當歸、丹參、紅花等中藥組成,具有益氣養陰,活血解毒的功效。方中黃芪具有補氣固表,利尿托毒,排膿,斂瘡生肌等功能[1],而黃芪甲苷為黃芪主要有效成分,因而能夠反映心肌康顆粒的主要作用。原標準其含量測定采用薄層色譜法測定,方法重現性差,測定結果不準確。本文參考《中國藥典》2005年版一部及相關文獻,建立了心肌康顆粒中黃芪甲苷含量測定的HPLC-ELSD法。結果顯示本法準確、可靠、重復性好,可用于該產品的質量控制。

          1儀器與試劑

          1.1儀器Agilent1100高效液相色譜儀;Alltech2000型蒸發光散射檢測器(ELSD)。

          1.2試藥黃芪甲苷對照品:中國藥品生物制品檢定所,批號:0781-200311(供含量控制用)。甲醇、乙腈為色譜用試劑,其他試劑均為分析純;水為重蒸水;心肌康顆粒(青島國風藥業股份有限公司提供)。

          2方法與結果

          2.1色譜條件及系統適應性檢測條件色譜柱:KromasilODSC18,(5μm,150mm×4.6mm);流動相:乙腈-水(32:68);柱溫:40℃;流速:1.0ml/min;ELSD檢測器漂移管溫度:105℃,霧化氣體為壓縮空氣,流速:2.6ml/min;理論板數按黃芪甲苷峰計算應不低于4000。色譜圖見圖1、圖2。

          2.2溶液的制備

          2.2.1對照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對照品適量,加甲醇制成每毫升中含0.5mg的溶液,即得。

          2.2.2供試品溶液的制備取裝量差異項下的本品5g,精密稱定,置索氏提取器中,加甲醇100ml回流提取4h,提取液回收溶劑并濃縮至干,殘渣加水10ml,微熱使溶解,用水飽和正丁醇振搖提取4次,每次20ml,合并正丁醇液,濃縮,用1%氫氧化鈉溶液洗滌2次,每次20ml,棄去氫氧化鈉溶液,再用正丁醇飽和的水洗滌2次,每次20ml,棄去水液,正丁醇液蒸干,殘渣用甲醇溶解并轉移至5ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得[3]。

          2.3線性關系考察精密稱取黃芪甲苷對照品適量,加甲醇配制成每毫升含黃芪甲苷0.9396mg的溶液,分別精密量取1、2、4、6、7ml至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,稀釋成濃度為0.09396,0.18792,0.37584,0.56376,0.65772mg/ml的溶液,分別精密吸取20μl,注入高效液相色譜儀,依法測定,以黃芪甲苷峰面積常用對數值為縱坐標Y,濃度常用對數值為橫坐標X,進行線性回歸,得回歸方程:

          LgA=1.6518LgC+6.8322r=0.9998。

          結果表明黃芪甲苷在1.8792~18.7920μg之間呈良好的線性關系。

          2.4重復性試驗精密稱取同一供試品5份,按“2.2.2”項下制備供試品溶液,在上述色譜條件下進樣10μl,測得峰面積值,計算黃芪甲苷含量平均值為0.587mg/g,RSD=0.53%。

          2.5穩定性試驗精密稱取供試品,按“2.2.2”項下制備供試品溶液,精密吸取供試品溶液20μl,在0、1、12、24、48、72h內測定,共6次,測得黃芪甲苷峰面積積分值的平均值為2883506,其RSD=1.26%。結果表明,本方法的供試品溶液在3天內穩定。

          2.6回收率試驗采用加樣回收法,精密稱取已知含量的心肌康顆粒(批號:070101)適量,分別精密加入濃度為0.5064mg/ml的黃芪甲苷對照品溶液2ml,按“2.2.2”項下提取,測定,計算回收率,所得回收率為96.7%,RSD=1.68%。結果見表1。表1回收率試驗結果

          2.7樣品含量測定取不同批號的心肌康顆粒,按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,在上述色譜條件下,精密吸取對照品溶液10、20μl,供試品溶液20μl,注入液相色譜儀,測定,以外標兩點法對數方程計算。樣品含量測定結果見表2。

          3討論

          因黃芪甲苷紫外吸收較差,是末端吸收,若用紫外檢測器檢測,則其靈敏度低,干擾較大,重現性較差,尤其復方制劑,測定其含量更加困難,因此,此方表2樣品含量測定面的報道較少,一般采用薄層掃描法,而薄層掃描法的穩定性和重現性較差,且操作繁瑣。近幾年來,HPLC-ELSD法測定黃芪甲苷含量的文獻有報道,其靈敏度、穩定性及重現性均能符合含量測定的要求。本試驗即參考了文獻中的條件,考察了蒸發光檢測器的漂移管溫度和霧化器氣體流量對黃芪甲苷的響應值的影響,通過分別逐漸改變漂移管溫度和霧化器氣體流量,記錄峰面積與信噪比的變化,選擇了最優的溫度和載氣的流速[2]。

          【參考文獻】

          1國家藥典委員會.中華人民共和國藥典,2005年版一部.北京:化學工業出版社,2005,212-213.

          2鄢立新.不同廠家黃芪注射液中黃芪甲苷的含量考察.中成藥,2004,26(8):626-628.

          3陳岳蓉.HPLC-ELSD測定芪鹿益腎片中黃芪甲苷的含量.中成藥,2004,26(8):629-631.