HPLC法測定醋氯酚酸片

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【摘要】用高效液相色譜法測定醋氯酚酸片中有關物質。方法選用WatersC18（3.9mm×150mm，5μm）色譜柱；流動相為0.0025mol/L醋酸鈉溶液-甲醇-冰醋酸（32：68：0.3）；檢測波長為275nm；流速為1.0ml/min；柱溫為40℃。結果醋氯酚酸的保留時間約7min；有關物質雙氯酚酸鈉和未知雜質的保留時間約6min與9min；有關物質雙氯酚酸鈉線性范圍：0.5～4.0μg/ml,Y=1.99E+004X-3.96E+003，r=0.9990。結論本方法簡便、準確,適于醋氯酚酸片有關物質的測定。

【關鍵詞】醋氯酚酸雙氯酚酸鈉高效液相色譜（hplc）法有關物質

【Keywords】aceclofenac;diclofenacsodium;HPLC;relatedsubstance

醋氯酚酸屬苯乙酸類非甾體抗炎鎮痛藥，為雙氯酚酸的衍生物，用于急性炎癥、關節炎和疼痛的治療。有報道含量測定采用高效液相色譜法［1，2］；有關物質采用薄層色譜法［3，4］。本試驗采用不同于報道的流動相對有關物質進行測定，結果表明：本實驗條件合理、有效，可將雙氯酚酸鈉及未知雜質與醋氯酚酸分離,測定結果準確、可靠。現報告如下。

1儀器與試藥

高效液相色譜儀為Waters2695和Waters2996二極管陣列紫外/可見檢測器，高效液相色譜柱為WatersC18（3.9mm×150mm，5μm）。甲醇為色譜純，冰醋酸、無水醋酸鈉均為分析純。對照品醋氯酚酸、雙氯酚酸鈉均為中國藥品生物制品檢定所提供,含量分別為99.2%、100.0%；供試品醋氯酚酸片3批，批號為H40024（A）、H40025（B）、H40026（C）。

2方法與結果［1，2］

2.1色譜條件與系統適用性試驗色譜柱溫為40℃；流動相為0.0025mol/L醋酸鈉溶液-甲醇-冰醋酸（32：68：0.3）；檢測為波長275nm；流速為1.0ml/min；進樣量10μl。

醋氯酚酸的保留時間約為7min，雙氯酚酸鈉和未知雜質峰的保留時間分別約為6min和9min；雙氯酚酸鈉與醋氯酚酸及未知雜質峰間的分離度分別為2.5和6，理論板數按醋氯酚酸計為5000。色譜圖見圖1。

2.2有關物質

2.2.1線性范圍精密稱取雙氯酚酸鈉對照品10mg置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取該溶液25ml置100ml量瓶中用流動相稀釋至刻度，搖勻。精密量取1.0、2.0、4.0、6.0、8.0ml分別置50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液1～5。在上述色譜條件下,分別進樣5次，記錄色譜圖。以濃度X為橫坐標,峰面積Y為縱坐標作標準曲線，計算線性回歸方程。結果本品在0.5～4.0μg/ml范圍內呈線性關系：Y=1.99e+004X-3.96e+003，r=0.9990。

2.2.2測定法精密稱取供試品適量（相當于醋氯酚酸50mg）置50ml量瓶中,加甲醇適量振搖使溶解，用流動相稀釋至刻度,搖勻，即得供試品溶液。以有關物質線性范圍項下濃度2.0μg/ml溶液為對照品溶液。在上述色譜條件下,分別進樣5次，調節檢測器靈敏度，使對照品溶液主成分峰高度達到滿量程的20%，相對標準偏差不得過3.0%。記錄供試品溶液色譜圖至主成分峰保留時間的2倍，用外標法計算有關物質的含量。見表1。表1有關物質測定結果

2.3精密度試驗取有關物質測定項下供試品批號（A）溶液，連續5次進樣測定,RSD為1.5%。

2.4重復性試驗取同一批樣品（批號A）,分別稱取5份,按照有關物質測定項下方法操作,RSD為2.91%。

2.5穩定性試驗將有關物質測定項下的溶液光照放置3天和9天及30天，按上述色譜條件進行測定，同時新配制對照品溶液。測定結果詳見表1。色譜圖見圖2。

2.6響應值測定在上述色譜條件下,分別取線性范圍項下對照溶液1～510μl注入液相色譜儀，其主峰的保留時間約為6min，理論板數按醋氯酚酸鈉峰計算不得小于4000，重復進樣5次，計算每種溶液的平均面積及相對標準偏差值。結果見表2。表2響應值測定結果

3討論

本試驗采用HPLC法測定醋氯酚酸片中有關物質雙氯酚酸鈉和未知雜質的含量。該法可有效地將醋氯酚酸與有關物質分離，且分離度好，結果更準確地反映出樣品的純度與質量。

圖2色譜圖

該樣品不是很穩定，對光比較敏感，光照3～30天，有關物質的含量由0.1%增加到65%以上。顏色由無色變為橘黃色。

測定有關物質的供試品溶液濃度為1mg/ml，從表2可以看出：有關物質的對照溶液的濃度為供試品溶液的0.002倍（0.2%），測定結果的相對標準偏差較小，有較強的可操作性。

該方法精密度高，重現性好，適用于醋氯酚酸片有關物質測定。

【參考文獻】

1王槐武,黃勵.高效液相色譜法測定醋氯酚酸緩釋片的含量.中國現代應用藥學,2001,18（1）:53-55.

2梅之南,雷嘉川.高效液相色譜法測定醋氯酚酸腸溶片的含量.中國藥師,2000,5（3）:288-299.

3王金香,陳碧妍,畢秀玲.醋氯酚酸雜質的薄層色譜法檢測.廣東藥學院學報,1997,13（2）：127.

4石寧,秦英.HPLC法測定醋氯酚酸片有關物質影響因素.西北藥學雜志,2003,18（6）:247-248.

5金悠，陳匯，顧世芬，等.反相高效液相色譜法測定人血中的醋氯酚酸.色譜,2004,22（3）：252-254.

6劉紅梅,金銳.高效液相色譜法測定人血中醋氯酚酸的藥物濃度.藥物分析雜志,2003,23（5）:328-330.