HPLC法測定拈痛丸鹽酸小檗堿含量

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【摘要】目的測定拈痛丸中鹽酸小檗堿的含量。方法采用離子對色譜法，DiamonsilC18柱，乙腈水（體積比52∶48）（每1000mL加磷酸二氫鉀3.4g，十二烷基硫酸鈉1.7g）為流動相，流速為1.0mL·min-1，檢測波長265nm，柱溫為室溫。結果鹽酸小檗堿平均回收率為99.8%，RSD為2.89%（n=6）。結論該法可用于拈痛丸中鹽酸小檗堿的含量測定。

【關鍵詞】拈痛丸；鹽酸小檗堿；離子對色譜法；含量測定

Abstract:ObjectiveTodevelopamethodforthecontentdeterminationofberberinehydrochlorideinNiantongwan.MethodsTheanalysiswasperformedonaDiamonsilC18columnusingacetonitrilewater(52∶48,containing3.4gofpotassiumdihydrogenphosphateand1.7gofsodiumlaurylsulfateper1000mL）asmobilephase.Theflowratewas1.0mL·min-1andthedetectionwavelength265nm.ResultsTheaveragerecoveryforberberinehydrochloridewas99.8%withRSD2.89%(n=6).ConclusionThemethodcanbeusedforthecontentdeterminationofberberinehydrochlorideinNiantongwan.

Keywords:Niantongwan；berberinehydrochloride；hplc

拈痛丸為香港注冊的中藥成方制劑，由廣藿香、延胡索、厚樸、黃連等18味中藥制成，具有解表化濕、理氣和胃、燥濕除滿、溫中止痛之功效。臨床用于治療外感風邪、濕滯困阻所致的惡寒發熱、腹痛吐瀉、頭暈目眩、身體上下諸痛，兼治因寒濕氣滯所致的脘腹脹痛、不思飲食。此產品目前無質量標準。本文建立了拈痛丸中鹽酸小檗堿含量測定的離子對色譜法，該法具有分離效果好、靈敏、準確等優點，可用于該產品的質量控制。

1儀器與試藥

LC10ATVP型高效液相色譜儀（日本島津），SPD10ATVP型紫外可見檢測器（日本島津），HW2000色譜工作站（南京千譜軟件有限公司）。DL360超聲波清洗器（寧波石浦海天電子儀器廠），工作頻率（4.5±0.05）kHz，輸出功率240W。鹽酸小檗堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110713－200208），拈痛丸（中港藥業公司，每包1g，每盒12包）；乙腈、十二烷基硫酸鈉為色譜純，磷酸二氫鉀為分析純，水為雙蒸水。

2實驗部分

2.1樣品液制備

2.1.1對照品溶液的制備精密稱取在100℃干燥5h的鹽酸小檗堿對照品19.8mg，置200mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液(鹽酸小檗堿濃度為99μg·mL-1)。

2.1.2供試品溶液的制備取拈痛丸樣品10包，研碎，取約1.5g，精密稱定，置100mL量瓶中，加入鹽酸甲醇（體積比1∶100）約95mL，60℃水浴中加熱15min，取出，超聲處理30min，室溫放置過夜，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，續濾液045μm濾膜過濾，作為供試品溶液。

2.1.3陰性對照液的制備取處方組成中除黃連外的其余成分制成不含黃連的陰性對照品，按“21.2”項下的制備方法處理得陰性對照液。

2.2色譜條件及系統適用性試驗色譜柱為DiamonsilC18柱（250mm×4.6mm，5μm，迪馬公司），乙腈水（體積比52∶48）（每1000mL加磷酸二氫鉀3.4g，十二烷基硫酸鈉1.7g）為流動相，流速為1.0mL·min-1，檢測波長265nm，柱溫為室溫。分別取對照品溶液（鹽酸小檗堿濃度為29.7μg·mL-1）、供試品溶液和陰性對照溶液10μL注入色譜儀，理論塔板數以鹽酸小檗堿計算應不低于6500；鹽酸小檗堿的拖尾因子為1.16，保留時間約為21.8min，鹽酸小檗堿與其他組分可基線分離，陰性樣品不干擾樣品測定，見圖1。

A.對照品;B.樣品;C.陰性1.鹽酸小檗堿

圖1鹽酸小檗堿對照品、樣品及陰性的高效液相色譜圖（略）

Fig.1HPLCchromatogramsofberberinehydrochloride(A)andsample(B)andnegative(C)

2.3方法學考察

2.3.1標準曲線制備分別吸取一定量的鹽酸小檗堿對照品貯備液，加甲醇稀釋成鹽酸小檗堿濃度為4.95、9.9、19.8、29.7、39.6、49.5、59.4μg·mL-1的溶液。依次進樣10μL，每個濃度測定3次以上。以峰面積（A）對對照品溶液系列濃度（C）進行回歸，得鹽酸小檗堿回歸方程A=44782C+42971，r＝0.9999。表明鹽酸小檗堿濃度在4.95～59.4μg·mL-1之間與峰面積線性關系良好。

2.3.2精密度試驗取質量濃度為29.7μg·mL-1的鹽酸小檗堿對照品溶液10μL，連續測定5次，其峰面積的平均值為1387708，RSD為1.38%，表明儀器精密度良好。

2.3.3穩定性試驗取供試品溶液（CK20060201）在0，2，4，6，8h分別進樣10μL，記錄峰面積，結果鹽酸小檗堿峰面積的平均值為1341450，RSD為216%，表明供試品溶液在8h內穩定。

2.3.4重復性試驗取同一批號（CK20060201）樣品6份，照“212”方法制備，進樣測定，結果鹽酸小檗堿平均含量為1.914μg·mL-1，RSD為0.85%，表明方法精密度良好。

2.3.5加樣回收率試驗精密稱取同一批號樣品（CK20060201）共6份，加入相應量的鹽酸小檗堿對照品，照“2.1.2”方法處理并測定，計算回收率，結果見表1。鹽酸小檗堿平均回收率為99.8%，RSD為2.89%，表明本方法準確可靠。

2.4樣品測定取拈痛丸樣品3批，照“2.1.2”方法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液（29.7μg·mL-1）與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，計算樣品中鹽酸小檗堿的含量，結果見表2。

表1鹽酸小檗堿回收率試驗結果（n=6）（略）

Tab.1Resultsofrecoverytest(n=6)

表2樣品測定結果（n=3）（略）

Tab.2Resultsofsampledetermination(n=3)

3討論

3.1鹽酸小檗堿是中藥黃連的有效成分，含量較高，故以其為指標來控制拈痛丸的質量。

3.2本文分別選用乙腈0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液［1］、乙腈0.1%磷酸溶液［2］為流動相測定鹽酸小檗堿，但分離效果不好。參照文獻［3］采用離子對色譜法，并調整乙腈與水的體積比為52∶48，方得滿意結果。

3.3采用鹽酸甲醇（體積比1∶100）［4］為溶劑，分別超聲提取20、30、40、50、60min，結果表明30min即可提取完全，所以選擇超聲時間為30min。

3.4鹽酸小檗堿的含量測定，文獻報道的測定波長有345nm［4］、347nm［5］、265nm［6］，測定中曾以345、347nm為測定波長，但鹽酸小檗堿與其他峰的分離度達不到要求，且峰型不好，以265nm為測定波長，鹽酸小檗堿峰型及與其他峰的分離好，所以本文選擇測定波長為265nm。

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