應激性生殖內分泌功能

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摘要目的：觀察應激對動物生殖內分泌的影響，建立符合臨床需要的生殖內分泌紊亂的動物模型。方法：用懸吊和制動方法造成動物急性或重復應激狀態，用放射免疫結合的方法測定血漿有關性激素的水平，用陰道涂片的方法觀察雌性動物的性周期，用常規方法觀察雄性動物的性行為。結果：急性制動應激和急性懸吊應激1，2，3h均能使雄性小鼠血漿睪酮水平顯著降低,皮質酮水平則明顯升高。大鼠急性制動應激3h，可見血漿睪酮水平及睪丸中合成酶17α-羥化酶、17,20-羥甾脫氫酶和3β-裂解酶活性顯著降低，皮質酮水平則明顯升高。重復懸吊應激可使雄性小鼠性行為低下或缺損，雌性小鼠性周期紊亂，分別可見血漿睪酮和雌二醇水平降低。結論：應激可使生殖內分泌功能低下或紊亂，在此過程中性激素降低起著重要的作用。提示臨床上各種軀體或心理應激引起的生殖內分泌功能低下或紊亂也與相關性激素降低或分泌節律失常有關,應激性生殖內分泌功能低下或紊亂動物模型可供相關藥物研究。

應激是指內外環境劇變刺激時，機體出現的包括精神、神經、內分泌和免疫系統等的綜合應答狀態。強烈身心應激尤其是長期慢性應激嚴重影響著人類的身心健康，導致臨床疾病、亞健康狀態及早衰［1,2］。

生殖內分泌系統對應激刺激尤為敏感，月經失調、高雄激素血癥、閉經、不孕、男女性功能障礙等均與身心應激密切相關［3～8］。在“生物醫學模式”向“生理、心理和社會醫學模式”轉變的今天，應激方法尤其是心理應激方法在相關藥物研究中具有十分重要的作用。現將幾年來我們建立的及國外應用較多、可操作性強的有關應激性生殖內分泌功能低下模型作一介紹［9～11］。

材料與方法

1急性應激性睪酮水平低下模型

1.1小鼠制動應激性睪酮水平低下模型取性成熟昆明種小鼠，體重36～38g，室溫20～23℃，光照（14h光∶10h暗），適應環境3d,d4上午9∶00～12∶00，將小鼠置于50ml茶色瓶中，完全限制其自由活動即制動應激1～3h，應激期間不影響動物自由呼吸。應激結束即刻取血，肝素抗凝，分離血漿，用放射免疫結合方法測定血漿睪酮及皮質酮水平。

1.2小鼠懸吊應激性睪酮水平低下模型取性成熟昆明種小鼠，體重36～38g，室溫20～23℃，光照（14h光∶10h暗），適應環境3d,d4上午9∶00，以小鼠尾部為支點，將其懸吊于水面上，水溫(25±1)℃，水深20cm，懸吊高度以小鼠前肢剛接觸水面為度，懸吊時間1～3h，應激結束即刻取血，肝素抗凝，分離血漿，用放射免疫結合方法測定血漿睪酮及皮質酮水平。

1.3大鼠制動應激性睪丸功能低下模型取性成熟SD大鼠，體重230～250g，室溫20～23℃，光照（14h光∶10h暗），適應環境3d,d4上午9∶00將動物置于透明的聚乙烯圓錐形的制動應激裝置中，使頭部朝圓錐方向，圓錐大小以完全限制動物活動為度，位于動物鼻部的圓錐體處，開一直徑1cm的孔，以保證動物自由呼吸，如此應激3h。

2重復應激性生殖內分泌功能低下模型

2.1重復應激性小鼠性行為低下動物模型取性成熟昆明種小鼠，體重36～38g，室溫20～23℃，光照（14h光∶10h暗），適應環境3d。懸吊方法同前，懸吊1次/d，連續12d，并通過循序延長懸吊時間增加應激強度,d1～d3懸吊2h/d，d4～d6懸吊3h/d，d7～d9懸吊4h/d，d10～d12懸吊5h/d，每天應激時間安排在上午9∶00～下午2∶00。d6下午7∶00～9∶00開始觀察每天應激后及末次應激恢復24h后15min內性行為，即舔吻、跨騎、交配的潛伏期、發生數及發生率,部分動物于末次應激后30min取血，肝素抗凝，分離血漿供血漿中睪酮及皮質酮水平測定。

2.2重復應激性雌小鼠性周期失常、雌二醇降低模型取性成熟昆明種雌性小鼠，體重34～36g，室溫20～23℃，光照（14h光∶10h暗），每天上午7∶30～8∶30陰道涂片，連續15d。選擇有規律性周期的動物，懸吊方法同前，懸吊1次/d，連續12d，并通過循序延長懸吊時間增加應激強度，d1～d3懸吊1h/d,d4～d6懸吊2h/d,d7～d9懸吊3h/d，d10～d12懸吊4h/d。每天應激時間安排在上午9∶00～12∶00。應激期間繼續每天陰道涂片，觀察性周期應激性變化。于應激后第2個動情期，取血，肝素抗凝，分離血漿，用放免法觀察血漿中雌二醇水平應激性變化。

結果

1急性應激性睪酮水平低下模型

急性制動應激和懸吊應激1,2,3h均能使小鼠血漿睪酮水平顯著降低，相反，皮質酮水平則顯著升高。急性制動應激3h可使大鼠血漿睪酮水平及睪丸中睪酮合成酶17α-羥化酶、17,20-裂解酶和3β-羥甾脫氫酶(3β-HSD)活性顯著降低，而血漿皮質酮水平明顯升高。

2重復應激性生殖內分泌功能低下模型

連續懸吊應激6d，即可見雄性小鼠性行為降低，應激12d性行為進一步降低，甚至達到缺損的程度，同時血漿睪酮水平降低，而皮質酮水平及腎上腺指數明顯升高。末次應激后恢復24h動物性行為仍然處于低下狀態。遠低于雄性小鼠應激強度的重復應激12d可使雌性小鼠性周期延長或紊亂，陰道涂片可見動情期角化上皮細胞減少，同時雌二醇水平顯著降低。

討論

下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸功能亢進與下丘腦-垂體-性腺（HPG）軸功能降低為機體應激反應的明顯特征。血漿中皮質酮水平升高為判斷機體處于應激狀態的經典指標，而腎上腺指數升高既可反映慢性應激過程中下丘腦-垂體軸應激反應對腎上腺作用的結果，也與慢性應激引起的血漿皮質酮水平升高密切相關。現有大量研究表明，HPA軸功能應激性亢進與HPG軸功能應激降低密切相關，應激反應時，下丘腦促腎上腺皮質釋放激素（CRF）及腎上腺糖皮質激素（GCS）大量釋放，CRF和gCS均可在下丘腦、垂體、性腺（睪丸或卵巢）多水平抑制HPG軸功能［12～19］，我們發現睪酮應激性降低與皮質酮升高成反比［10］。臨床上許多婦科疾病如閉經、多囊卵巢等均伴有腎上腺功能亢進［4,5,7,20，21］。可見，觀察血漿皮質酮水平或腎上腺指數，在應激性生殖內分泌功能低下或紊亂模型及藥物研究中具有重要的意義。

身心應激是生殖內分泌疾病、男女性功能低下或障礙的重要誘因。所以，用應激方法造成生殖內分泌功能低下或紊亂動物模型，觀察藥物的作用能很好地預測藥物的臨床療效。而且，應激性生殖內分泌功能低下或紊亂動物模型具有穩定、重現性好、可操作性強、無須特殊儀器設備的優點。綜上所述，應激性生殖內分泌功能低下或紊亂動物模型在防治生殖內分泌疾病，男女性功能降低及延緩生殖內分泌功能衰老的藥物研究中具有重要的作用。

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