肺癌細胞技術論文

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一、資料與方法

1、挑選本院2010年6月至2012年12月送檢病理科支氣管鏡刷檢細胞學標本252例。所有的患者最后均確診為肺癌。男184例，女68例，年齡44～85歲，(平均66．3歲)。所有的患者行支氣管鏡刷檢，同時薄層液基細胞學涂片與傳統(tǒng)涂片。

2、儀器:美國SurPathTMPrepstain全自動液基薄層細胞制片染片機(BDTriPath，BurlingtonNC，USA)及相關耗材。采用奧林巴斯電子支氣管鏡(BF-260或1T260工作鏡)進行檢查。鏡下發(fā)現肺癌的直接征象或間接征象者，根據胸部CT提示的病變行透視下支氣管鏡肺活檢。所有患者均在活檢部位采用南京微創(chuàng)一次性保護型細胞刷刷檢，將毛刷頭直接在玻片上常規(guī)涂片1張。再將毛刷頭置于盛有10mlCyteRichRed固定液的50ml離心管中充分震蕩漂洗收集細胞。

3、制片方法

3.1傳統(tǒng)涂片方法:纖維支氣管鏡刷頭直接涂抹于載玻片上，涂片1張，干燥，95%乙醇固定10min，常規(guī)HE染色鏡檢。

3.2BDTriPath制片方法:標本加入專用50ml離心管中，使用程控離心機以Hettich3#程序600r/min離心10min，迅速管架倒置180°傾出上清液，加入CyteRichRed固定液20ml，靜置30min，Hettich的3#程序以600r/min離心10min，迅速管架倒置180°傾出上清液，渦漩混合器振蕩均勻，加入10mlTris緩沖液，混均，移至12ml的離心管，Hettich的4#程序以600r/min離心5min，迅速管架倒置180°傾出上清液，渦漩混合器振蕩(15±5)s。管架放在PrePStain系統(tǒng)上，靜置10min，等待上機自動制片染色。

4、判斷標準:涂片診斷采用正常、可疑癌細胞、癌細胞三種分類方法，后兩項為陽性標本。盡量由同一位醫(yī)師操作電子支氣管鏡采集標本，由兩位細胞病理學醫(yī)師同時閱片鏡檢，以找到癌細胞為陽性。

5、統(tǒng)計學方法:統(tǒng)計學處理數據采用SPSS10．0軟件包進行χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

二、結果

兩種涂片質量比較:傳統(tǒng)涂片，涂片范圍大小不一，涂片背景紅細胞白細胞多，細胞分布厚薄不均，胞質核漿結構對比不明顯，胞核染色質均一模糊、核仁不清;支氣管鏡刷檢細胞標本LCT制片后，細胞集中于涂片范圍直徑15mm專用玻片上，細胞界限清楚，涂片背景干凈清晰，細胞分布單個散在或成團分布，有立體感，胞質著色鮮艷、易于觀察，胞核核膜分明，核內染色質及核仁清晰可見。薄層液基細胞學涂片診斷肺癌陽性率為58．33%，(146/252)，其中中央型肺癌98例，周圍型肺癌48例。傳統(tǒng)涂片診斷肺癌的陽率為33．19%，(84/252)，其中中央型肺癌68例，周圍型肺癌16例。液基薄層細胞學與傳統(tǒng)涂片的陽性率的差異有統(tǒng)計學意義P＜0．05。

三、討論

支氣管鏡刷檢細胞學標本應用傳統(tǒng)涂片方法制片，受細胞新鮮程度、細胞量、出血及炎性背景、制片技術等因素影響，造成背景不清晰、涂片細胞易重疊、厚薄不均、細胞形態(tài)不易觀察、有意義細胞數量偏少，容易出現假陰性或假陽性結果，漏診重要病變。液基薄層細胞學制片技術(LCT)是近年來出現一種制片技術的革新，明顯優(yōu)于傳統(tǒng)巴氏涂片的檢查方法，其中有代表性的是BDThiPth離心沉降技術和新柏氏(ThiPthTCT)模式技術。兩種方法工作原理不同，分別為重力沉降式和過濾膜式，已經廣泛成熟應用于宮頸細胞學檢查和TBS診斷報告，對比傳統(tǒng)巴氏涂片，宮頸癌及癌前病變(低度鱗狀上皮內病變和高度鱗狀上皮內病變)檢出率大大提高，標本采集及制片質量的優(yōu)越性是傳統(tǒng)涂片技術無法比擬的，特別是BDThiPth制片技術在細胞數量、背景去除非診斷性雜質、全自動制片染色及診斷質量尤為突出。美國FDA認證:超柏式液基薄層細胞學檢查是所有液基細胞學技術中檢出率最高的技術。2005年美國病理協(xié)會非婦科細胞學實驗室比較液基制片方法與傳統(tǒng)制片方法在體液樣本檢測能力，證實液基制片方法更容易檢出腫瘤。

對比傳統(tǒng)涂片，LCT制片使細胞在載玻片上分布均勻，厚薄一致，細胞數量多，集中于15mm范圍內易于閱片，核染色質著色鮮明，核漿對比效果好，易于觀察核結構，染色背景清晰，制片質量十分滿意，陽性率顯著提高。LCT制片技術和診斷質量體會:支氣管鏡刷檢由于全部收集或大部分收集送檢標本，最大程度保留病變細胞，尤為適用LCT制片方法;液基涂片中的細胞核可能不如傳統(tǒng)涂片中那樣深染，但細胞核異型性是判讀惡性或可疑惡性病變的重要重要標準，一般認為核占優(yōu)勢、核漿比例高、核膜不規(guī)則、染色質凝塊狀、核仁清或多個小核仁為惡性證據;巴氏染色胞漿在區(qū)分腺癌或分化鱗癌很有幫助，前者胞漿見空泡，后者胞漿橘黃色、含角蛋白;仔細觀察成團核深染的細胞，如懷疑異常，在背景中全面尋找單個異型細胞更有意義;提高制片質量顯著，但診斷陽性率的改善還需病理診斷醫(yī)師勤于積累，LCT在支氣管鏡刷檢細胞標本應用時間及應用范圍還比較晚，對同一份標本同時進行普通涂片，以積累經驗，減少誤診。

支氣管鏡檢查是目前診斷肺癌的常規(guī)檢查方法，刷檢聯合組織活檢的重要手段。傳統(tǒng)支氣管鏡黏膜細胞學檢查是在支氣管鏡檢查過程中用支氣管毛刷直接在普通玻片上涂片，診斷率低。LCT對肺癌有更高的診斷率。國內也有少量文獻報道。本研究結果顯示，經過與組織病理學對照，普通涂片法檢出敏感度為33．19%，而LCT檢出敏感度為58．33%，較普通涂片法提高了25．14%，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

四、總結

細胞病理學是腫瘤病理診斷的重要組成部分，應用LCT明顯增加腫瘤細胞數和改善涂片質量，便于觀察核漿結構，顯著提高診斷陽性率，拓寬了支氣管鏡刷檢細胞學檢查的技術手段，有利于細胞病理學的標準化和規(guī)范化發(fā)展，值得臨床推廣使用。

作者：蔡志明劉建南吳琪茵