沙棘與漿果協同抗老研究

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本文作者：焦巖1常影1王振宇2作者單位：1.齊齊哈爾大學食品與生物工程學院2.哈爾濱工業大學食品科學與工程學院

沙棘又名醋柳、酸刺子，為胡頹子科沙棘屬多年生落葉灌木或小喬木[1]。據報道，沙棘中含有維生素類、糖類、氨基酸類、不飽和脂肪酸、多酚類、黃酮類、SOD、5-羥色胺以及各種微量元素等，具有抗氧化、抗衰老、提高免疫等多種作用[2-4]。藍莓、藍靛果、山葡萄中都含有大量的花色苷類物質，抗氧化、降血脂、抗衰老等多項生理功能[5-7]。本研究利用大果沙棘乙醇提取物分別和藍莓、藍靛果以及山葡萄的乙醇提取物進行復配，比較復配后各組間的抗衰老效果及各有效成分間的協同抗衰老作用，為營養保健食品開發和抗衰老藥物的篩選提供了參考。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1主要原料與試劑

大果沙棘鮮果、藍莓果：黑龍江省孫吳縣林業局；藍靛果、山葡萄：吉林長白山地區。4種漿果分別經低溫烘干后，粉碎至40目，70%乙醇超聲波浸提30min，提取3次后，過濾、濃縮成一定體積的提取物水溶液，放入4℃冰箱備用。SOD、GSH-PX和MDA試劑盒：南京建成生物工程研究所；其他試劑：市售AR級。

1.1.2實驗動物

昆明種小鼠，雌雄各半，體重(22±3)g，共112只，黑龍江省獸醫研究所提供。1.1.3主要儀器與設備離心機，水浴鍋，游泳箱，電子天平，756PC紫外/可見分光光度計，超聲波提取器等。1.2方法

1.2.1動物分組與衰老動物模型制備

動物分組：將喂養1個月小鼠隨機分為7組，生理鹽水(CTL)組、D-半乳糖衰老模型(Ⅰ)組、大果沙棘(Ⅱ)組、大果沙棘+藍莓(Ⅲ)組、大果沙棘+藍靛果(Ⅳ)組、大果沙棘+山葡萄(Ⅴ)組、大果沙棘+藍莓+藍靛果+山葡萄(Ⅵ)組。動物模型的建立：將小鼠適應性喂養1個月后，衰老模型組和各復合制劑組皮下注射25%的D-半乳糖溶液125mg/kg•d，連續28d；空白組每日皮下注射等劑量0.9%生理鹽水1次，連續28d。給藥方法：大果沙棘、藍莓、藍靛果、山葡萄提取液每天分別按3.0g/kgbw等體積灌胃，衰老模型組和對照組灌胃等體積的生理鹽水。實驗組灌胃不同劑量的受試物水溶液。動物自由攝食和飲水，每鼠日灌胃量0.15mL/10gbw，連續灌喂28d。

1.2.2指標測定

末次給藥2h后眼眶采血于試管中，低溫冷藏備用。取血后處死動物，取腦和肝臟制成勻漿，4000r/min離心15min，取上清液用Bradford法測蛋白質含量[8]。血清和組織中的SOD、GSH-PX的活性及MDA的含量測定均按試劑盒方法進行。

1.2.3數據分析

采用SPSS10.0統計軟件進行方差分析和t檢驗。

2實驗結果

2.1大果沙棘復合制劑對小鼠體重的影響

小鼠連續灌胃28d以后，與生理鹽水(CTL)組相比，D-半乳糖衰老模型(Ⅰ)組小鼠的體重增加緩慢。大果沙棘各復合制劑組實驗組和生理鹽水(CTL)組相比體重增加也比較緩慢，但增加量要高于D-半乳糖衰老模型組，結果見表1。說明大果沙棘復合制劑可抑制D-半乳糖衰老模型小鼠體重的增加，具有一定的減肥功能。

2.2大果沙棘復合制劑對小鼠血清和組織勻漿SOD活性的影響

與生理鹽水(CTL)組相比，D-半乳糖衰老模型(Ⅰ)組小鼠血清和肝、腦器官組織中的SOD活性顯著低于生理鹽水(CTL)組(P<0.01)；和衰老模型(Ⅰ)組相比，灌服大果沙棘各復合制劑組(Ⅱ-Ⅵ)小鼠的血清、肝臟和腦組織中SOD活性的明顯增強(P<0.05)；且復合制劑各組小鼠體內SOD活性和沙棘(Ⅱ)組相比均有所升高，Ⅵ組SOD活性最高且差異顯著(P<0.05)，結果見表2。說明大果沙棘和與之復配的各復合制劑可提高半乳糖衰老小鼠血清、肝臟和腦中SOD活性，并抑制模型小鼠體內SOD活性的下降，且各復合制劑具有協同增效的作用，Ⅵ組作用最強。

2.3大果沙棘復合制劑對小鼠血清和組織勻漿GSH-Px活性的影響

與生理鹽水(CTL)組相比，D-半乳糖衰老模型(Ⅰ)組小鼠血清和肝、腦器官組織中的GSH-Px活性顯著低于生理鹽水(CTL)組(P<0.01)；與衰老模型組相比，各復合制劑組小鼠血液、肝臟和腦中的GSH-Px活性均有顯著升高(P<0.05)，Ⅵ組小鼠的GSH-Px活性升高極其顯著(P<0.01)；各復合制劑組和沙棘(Ⅱ)組相比，小鼠血液、肝臟和腦中的GSH-Px活性都較高，Ⅵ組差異顯著(P<0.05)，結果見表3。實驗結果表明，大果沙棘和與之復配的各復合制劑可提高半乳糖衰老小鼠血清、肝臟和腦中GSH-Px活性，沙棘與其他制劑配伍后能協同抑制模型小鼠體內GSH-Px活性降低的作用，Ⅵ組協同效果最好。

2.4大果沙棘復合制劑對小鼠血清和組織勻漿MDA含量的影響

與生理鹽水(CTL)組相比，D-半乳糖衰老模型組小鼠(Ⅰ)血清、肝臟和腦中MDA含量顯著升高(P<0.01)，而灌而灌服大果沙棘各復合制劑組(Ⅱ-Ⅵ)的小鼠血清、肝臟和腦中MDA含量均明顯低于半乳糖衰老模型(Ⅰ)組(P<0.05)，且各復合制劑組MDA含量均和沙棘(Ⅱ)組相比均有所降低，Ⅵ組降低差異顯著(P<0.05)，結果見表4。說明大果沙棘和與之復配的各復合制劑均有降低半乳糖衰老小鼠血清、肝臟和腦組織中MDA含量作用，Ⅵ組復合制劑產生的協同效果最佳。

3討論

衰老(Aging)是多因素協同引起的生命漸趨弱化的過程，可引起生理功能相應減弱、適應能力和抵抗力下降等綜合表現。關于衰老的機制解釋很多，其中起主導地位的自由基學說認為：體內許多物質代謝中產生過氧化的自由基，使機體內的自由基處于不平衡狀態，過量的自由基就會引起機體損傷，會引起不飽和脂肪酸氧化成超氧化物，形成脂褐素，氧自由基過多會破壞細胞膜及其他重要成分，使蛋白質和酶變性，當自由基引起的損傷積累戰勝了機體的修復能力，導致細胞分化狀態的改變、甚至喪失，從而導致和加速衰老[9-12]。SOD是體內清除自由基的重要抗氧化酶，可以保護細胞免受損傷，隨著年齡的增長，體內SOD活性逐漸降低，故SOD活力的高低與衰老密切相關。GSH-Px是動物體內一種具有抗氧化作用的酶，保護細胞膜不受脂類代謝副產物、氧化自由基的破壞。MDA是機體脂質過氧化作用產生的脂質過氧化物，它可能引起細胞代謝及功能障礙甚至死亡，其含量與細胞損傷的程度呈正相關，可間接反映出機體受自由基攻擊的嚴重程度[13]。國內外已經有大量的研究證明了沙棘、藍靛果、藍莓、山葡萄在清除自由基、抗氧化、延緩衰老等方面的顯著作用，但都是對單一成分功能的報道。根據傳統理論：配伍用藥優于單味藥，多靶點優于單靶點。而無論是單味中藥或復方，它們的物質基礎是生物活性物質群，這些活性物質群按一定要求配伍組合，作用于多個靶點，經多途徑的整合而發揮作用，才能呈現多效性[14-15]。本研究通過實驗結果證明，大果沙棘及其復合制劑能顯著提高D-半乳糖衰老模型小鼠的血液、肝臟和腦中的SOD和GSH-Px活性，降低衰老模型小鼠體內血液、肝臟和腦中過氧化脂質產物MDA的含量(P<0.05)，進而說明大果沙棘及其復合制劑具有較好的清除氧自由基，防止脂質過氧化作用而產生的脂質過氧化物，對細胞代謝及功能具有保護作用，抗衰老作用明顯。對各復合制劑抗衰老效果進行綜合比較，各組大小依次為Ⅵ>Ⅳ>Ⅲ>Ⅴ>Ⅱ。其中，大果沙棘+藍莓+藍靛果+山葡萄(Ⅵ)組和沙棘組相比抗衰老效果極其顯著(P<0.01)，究其原因，可能是由于復合制劑中的各組分作用靶點和強度不同，幾種作用靶點不同的功能制劑組合后能以協同、整合方式對抗衰老的多個作用靶點發揮增強作用，所以產生更好的抗衰老效果。但其作用機理還不明確，還應從細胞及分子水平進一步研究。