黃褐毛忍冬的鑒別論文

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【摘要】目的對(duì)黃褐毛忍冬進(jìn)行鑒別、浸出物、含量測(cè)定特征研究，提高黃褐毛忍冬質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法對(duì)黃褐毛忍冬中的綠原酸、咖啡酸進(jìn)行鑒別；采用50%乙醇作溶劑，熱浸法測(cè)定黃褐毛忍冬浸出物含量；以50%甲醇作溶劑，超聲處理30min制備樣品溶液，采用高效液相色譜（HPLC）法，選用Luna〔5μm,C18(2),250mm×4.6mm〕色譜柱，體積流量1.0ml/min，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)327nm，流動(dòng)相為乙腈-0.4%磷酸（13：87）測(cè)定黃褐毛忍冬中綠原酸含量。結(jié)果采用薄層色譜法有效鑒別黃褐毛忍冬中的綠原酸、咖啡酸；采用50%乙醇熱浸能控制黃褐毛忍冬浸出物含量；HPLC法測(cè)定黃褐毛忍冬中綠原酸含量，綠原酸在10.49～125.9μg/ml范圍內(nèi)呈良好線性，R2=0.9999，通過(guò)方法學(xué)考察，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率實(shí)驗(yàn)、耐用性實(shí)驗(yàn)RSD值均小于2.0%。結(jié)論建立了黃褐毛忍冬鑒別、浸出物、含量測(cè)定方法，能有效用于黃褐毛忍冬質(zhì)量控制，為黃褐毛忍冬質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】黃褐毛忍冬；綠原酸；鑒別；浸出物；高效液相色

黃褐毛忍冬為忍冬科植物黃褐毛忍冬LonicerafulvotomentosaHsuetS.C.Cheng.的干燥花蕾或帶初開的花［1，2］，是20世紀(jì)70年代末發(fā)現(xiàn)的新種，首載于《植物分類學(xué)報(bào)》1979年17卷。在貴州省作為金銀花使用，稱“金銀花”“毛金銀花”“毛花”，地方習(xí)慣用于流行性感冒、咳嗽、肺炎等病［3］。《貴州省中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》1988年版、《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003年版也將黃褐毛忍冬作為“金銀花”“銀花”收載［4，5］。但是對(duì)黃褐毛忍冬的特征性研究較少，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)亦較低，本課題結(jié)合我省資源情況對(duì)黃褐毛忍冬鑒別、浸出物、含量測(cè)定等方面進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究，進(jìn)一步提高、完善黃褐毛忍冬質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有效控制藥品質(zhì)量。

1儀器與試藥

電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（GZX-9246MBE），電熱恒溫水浴鍋（HH.SY11-Ni），高效液相色譜儀（Waters1525型及2487紫外檢測(cè)儀），Luna〔5μm,C18(2),250mm×4.6mm〕色譜柱，電光分析天平（TG328A），電子天平（JP-160）電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（GZX-9246MBE），電熱恒溫水浴鍋（HH.SY11-Ni），綠原酸對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所110753-200413）、咖啡酸對(duì)照品、甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），磷酸(分析純)，娃哈哈純凈水。其余試劑為分析純。黃褐毛忍冬樣品由貴州飛龍雨公司提供。

2方法與結(jié)果

2.1黃褐毛忍冬綠原酸、咖啡酸成分［6］

鑒別研究取黃褐毛忍冬粉末0.2g，加甲醇5ml放置12h，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。另取綠原酸、咖啡酸對(duì)照品分別加甲醇制成每毫升含1mg的溶液作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)［3］，吸取兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜薄層板上，以乙酸丁酯-甲酸-水（7：2.5：2.5）的上層溶液為展開劑，展開，取出晾干，置紫外燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)（圖1）。

2.2黃褐毛忍冬浸出物含量

研究考慮黃褐毛忍冬的藥用方法和制劑提取的常規(guī)方法，參考《中國(guó)藥典》2005版Ⅰ部附錄ⅩA浸出物的測(cè)定方法，考察了水、50%乙醇、75%乙醇、95%乙醇4種溶劑的冷浸、熱浸兩種方法。測(cè)定10批樣品，測(cè)定結(jié)果受兩組變量A(浸出方法)、B（浸出溶劑）的影響，將浸出物含量、浸出方法、浸出溶劑應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析。結(jié)果顯示，應(yīng)用水、50%乙醇、75%乙醇熱浸，P=0.264＞0.05，結(jié)果無(wú)顯著性差異，考慮各種因素，采用50%乙醇作溶劑，熱浸法測(cè)定黃褐毛忍冬浸出物含量。

2.3黃褐毛忍冬中綠原酸含量測(cè)定［7］研究

2.3.1色譜條件

色譜系統(tǒng)由Wters1525型高效液相色譜儀及2487紫外檢測(cè)儀；色譜條件：色譜柱為L(zhǎng)una〔5μm,C18(2),250mm×4.6mm〕，流動(dòng)相為乙腈-0.4%磷酸（13∶87），檢測(cè)波長(zhǎng)327nm，柱溫30℃，流速1ml/min。測(cè)定方法：分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5～10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2.3.2對(duì)照品溶液的制備

取綠原酸對(duì)照品適量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每毫升含40μg的溶液，即得(10℃以下保存)。

2.3.3供試品溶液的制備

取樣品粉末（過(guò)四號(hào)篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.3.4線性關(guān)系的考察

取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品10.49mg，加50%甲醇50制成0.2098mg/ml的母液，分別吸取

母液配制成不同濃度的溶液，進(jìn)樣10μl，按上述色譜條件測(cè)定，以對(duì)照品溶液含量（μg/ml）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)計(jì)算綠原酸的回歸方程A=47003C-38602，R2=0.9999，線性范圍為10.49～125.9μg/ml。

2.3.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密吸取同一樣品試液（樣品編號(hào)No.9），分別于室溫下0，1，3，6，12h后進(jìn)樣，進(jìn)樣量10μl，分別記錄綠原酸的峰面積，RSD值為0.80%，結(jié)果表明樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批樣品（樣品編號(hào)No.9）按試液制備項(xiàng)下制備，平行制備樣品試液6份，按樣品測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，RSD值為0.98%，結(jié)果表明本法重復(fù)性良好。

2.3.7精密度實(shí)驗(yàn)

取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品（含量測(cè)定用）適量，制成40.25μg/ml的溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，進(jìn)樣量10μl，記錄峰面積積分，RSD值為0.30%，結(jié)果表明綠原酸的進(jìn)樣精密度良好。

2.3.8回收率實(shí)驗(yàn)

取已知含量的樣品（樣品編號(hào)No.9）精密稱定（約0.25g）6份，分別加入一定量的綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品（供含量測(cè)定用）按供試品溶液制備方法制備，按樣品測(cè)定法測(cè)定綠原酸含量，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率98.3%，RSD值為1.16%，表明綠原酸回收率較好。結(jié)果見表1。表1黃褐毛忍冬回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）

2.3.9耐用性實(shí)驗(yàn)

取樣品（樣品編號(hào)No.2），按樣品含量測(cè)定方法測(cè)定綠原酸峰面積，具體色譜條件：流動(dòng)相乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87），測(cè)定波長(zhǎng)327nm，流速1.0ml/min，柱溫30℃，色譜柱島津Shim-pack150l×4.6vp-ODS,進(jìn)樣量10μl，測(cè)定綠原酸峰面積積分。同時(shí)按上述制備、測(cè)定方法考察柱溫變化、流動(dòng)相比例變化、不同品牌色譜柱和流動(dòng)相流速變化對(duì)綠原酸峰面積積分的影響。超級(jí)秘書網(wǎng)

從考察以上四個(gè)方面的因素來(lái)看，除流速外，其余條件的改變RSD值均小于2.0%，符合HPLC條件的要求。而流速的改變，對(duì)照品的峰面積也成同樣變化。因此可以判斷：本方法測(cè)定黃褐毛忍冬中綠原酸含量的耐用性較好。

2.3.10樣品含量測(cè)定

按上述制備、測(cè)定方法測(cè)定10批20份樣品。結(jié)果見表2。表210批黃褐毛忍冬綠原酸含量測(cè)定結(jié)果（略）

3討論

在黃褐毛忍冬的貴州省質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)化學(xué)成分鑒別，本方法用于化學(xué)成分鑒別簡(jiǎn)便快速。

浸出物含量的測(cè)定是中藥材內(nèi)在質(zhì)量控制的一個(gè)粗放的控制指標(biāo)，本方法結(jié)合黃褐毛忍冬在實(shí)際使用和制劑生產(chǎn)中的特性，能簡(jiǎn)便易行的控制其內(nèi)在質(zhì)量。

本方法通過(guò)測(cè)定黃褐毛忍冬中綠原酸的含量能有效地控制黃褐毛的質(zhì)量，為提高黃褐毛忍冬的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

【參考文獻(xiàn)】

［1］中國(guó)植物志編委會(huì).中國(guó)植物志，72卷［M］.北京：科學(xué)技術(shù)出版社，1988:231.

［2］貴州植物志編委會(huì).貴州植物志，第2卷［M］.貴陽(yáng)人民出版社，1985:229.

［3］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005:21，152，附錄ⅥB.

［4］貴州省藥品監(jiān)督管理局.貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［S］.貴州科技出版社，2003:340.

［5］貴州省衛(wèi)生廳.貴州省中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，1988版［S］.貴陽(yáng)：貴州人民出版社，1990:85.

［6］茅青，賈憲生.黃褐毛忍冬化學(xué)成分的研究［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1989，24（4）：269.

［7］張艷焱，張?zhí)靷?，梁光義，等.黃褐毛忍冬不同炮制品中綠原酸的HPLC法含量測(cè)定［J］.中草藥，2003，31（8）：696.