前言:本站為你精心整理了竺黃復方片測試甘草酸討論范文,希望能為你的創作提供參考價值,我們的客服老師可以幫助你提供個性化的參考范文,歡迎咨詢。
【摘要】目的采用反相高效液相色譜(RPHPLC)法測定竺黃復方片中甘草酸的含量。方法采用kromasilC18柱(200mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.2mol·L-1乙酸銨-冰乙酸(65∶35∶1)為流動相,流速1ml·min-1,柱溫30℃,檢測波長250nm。結果在0.402~2.010μg之間,峰面積與進樣量的線性關系為A=673028.2878C-67302.7076(r=0.9998),平均回收率為99.66%。測得3批樣品中甘草酸的含量(以甘草酸銨計)分別為1.034,1.103和1.008mg/片。結論所建方法簡便、準確、重復性好,可用于竺黃復方片的質量控制。
【關鍵詞】竺黃復方片;甘草酸;反相高效液相色譜法
Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodtodetermineglycyrrhizicacidfromprescriptionofZhuhuangTablet.MethodsThecolumnwaskromasilC18(200mm×4.6mm,5μm),themobilephaseconsistedofMethanol~0.2mol·L-1Ammoniumacetate-Glacialacrticacid(65:35:1),withtheflowrateof1ml·min-1andtheUVdetectorwassetat250nm.ResultsThemethodshowedagoodrangeof0.402~2.010μg(r=0.9998).Theaveragerecoverywas99.66%.Theglycyrrhizicacidcontentsofthreebatchsampleswere1.034,1.103,1.008mg,respectively.ConclusionThismethodissimple,accurate,repeatableandsuitableforthedeterminationofglycyrrhizicacidinprescriptionofZhuhuangTablet.
Keywords:PrescriptionofZhuhuangTablet;Glycyrrhizicacid;RP–HPLC
竺黃復方片由甘草、力嘎都、牛黃、紅花、榜嘎(唐古特烏頭)等九味藥材組成,具有利肺、消炎、止痛的功效,用于小兒流感引起的肺炎、上呼吸道感染等[1]。該方標準收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準》藏藥第一冊,標準未收載鑒別項和含量測定項,不利于生產和使用的相關部門控制其藥品質量。本文擬建立甘草酸含量測定方法,增加含量測定項,提高其質量標準。
1材料
Waters2695/2690分離系統,2996(2487)檢測器,Empower色譜管理系統,島津UV-2100型紫外分光光度計,AtutoScienceAS5150超聲波清洗儀,Sartorius公司BP211D電子天平。甲醇為色譜純,水為重蒸餾水,其它試劑均為分析純。
2方法與結果
2.1甘草酸的含量測定
2.1.1色譜條件和系統適用性實驗用kromasil色譜柱(200mm×4.6mm,5μm),流動相為甲醇-0.2mol·L-1乙酸銨-冰乙酸(65∶35∶1),流速1ml·min-1,柱溫:30℃,檢測波長250nm[2],按甘草酸銨峰計,色譜柱理論塔板數不低于2000,甘草酸銨峰與其它峰達到基線分離,峰形對稱,色譜圖見圖1。
2.1.2溶液的制備對照品溶液的制備:精密稱取甘草酸銨對照品適量,置10ml量瓶中,加甲醇-0.2mol·L-1乙酸銨-冰乙酸(65∶35∶1)溶解并稀釋至刻度,搖勻,使成為每毫升中含對照品0.201mg的溶液即得。
樣品溶液的制備:取竺黃復方片適量,研細,取1.5g,精密稱定,置100ml具塞錐形瓶中,精密加入甲醇-0.2mol·L-1乙酸銨-冰乙酸(65∶35∶1)溶液45ml,稱定重量,超聲處理30min,放冷,稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續濾液作為供試品溶液,用0.45μm濾膜濾過即得。
陰性樣品溶液的制備:取缺甘草的陰性樣品,照上述樣品溶液制備方法處理即得陰性樣品溶液。
2.2方法學考察
2.2.1線性范圍精密量取上述甘草酸銨對照品溶液2,4,6,8,10μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖,測定其峰面積,并以峰面積A為縱坐標,進樣量C(μg)為橫坐標,進行回歸,得回歸方程:A=673028.2878C-67302.7076,甘草酸銨在0.402~2.010μg之間,進樣量與峰面積線性關系良好(r=0.9998)。
2.2.2精密度實驗精密吸取對照品溶液10μl,連續進樣5次,甘草酸銨峰面積的RSD為0.97%,表明儀器精密度良好。
2.2.3重復性實驗取竺黃復方片品(批號20040301)研細,取1.5g,5份,精密稱定,置100ml具塞錐形瓶中,精密加入甲醇-0.2mol·L-1乙酸銨-冰乙酸(65∶35∶1)溶液45ml,稱定重量,超聲處理30min,放冷,稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續濾液作為供試品溶液。按上述色譜條件測定,記錄色譜圖,并計算含量,結果甘草酸含量(以甘草酸銨計)平均含量為2.75mg·g-1,RSD為1.81%。上述實驗表明,該方法的精密度較好。
2.2.4穩定性實驗取樣品供試液(批號20040301)與甘草酸銨對照品分別于0,2,4,6,8h,分別進樣10μl注入色譜儀,記錄峰面積,平均峰面積為533271,RSD為1.97%,說明樣品溶液8h內穩定。
2.2.5加樣回收率實驗精密量取甘草酸銨對照品溶液(0.2010mg/ml)10ml,5份,分別置100ml具塞錐形瓶中,水浴上揮干甲醇,取已知含量的樣品(批號20040301)約0.8g,5份,精密稱定,置上述錐形瓶中,加入甲醇-0.2mol·L-1乙酸銨-冰乙酸(65∶35∶1)溶液45ml,稱定重量,超聲處理30min,放冷,稱定重量,用上述溶劑補足減失的重量,搖勻,濾過,取上清液,用0.45μm過濾膜過濾,作為供試品溶液。按上述色譜條件,注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖,并計算回收率。結果見表1。表1加樣回收率實驗結果(略)
2.2.6專屬性考察精密吸取陰性樣品溶液10μl,注入色譜儀,結果表明干草酸銨位置上無干擾峰。
2.2.7樣品測定樣品按2.1.2項下方法制備樣品溶液后,再按上述重復性試驗項下方法測定含量。3批樣品中甘草酸銨含量分別為1.034,1.103和1.008mg/片。
3討論
在甘草酸的含量測定中,提取溶媒比較了甲醇提取和流動相提取,結果表明用流動相提取效果更佳。
本實驗用RP–HPLC法測定竺黃復方片中甘草酸的含量,所建方法簡便、準確、重復性好,可用于竺黃復方片的質量控制。
【參考文獻】
[1]國家藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準·藏藥,第一冊[S].1995:251.
[2]國家藥典委員會.中國藥典,Ⅰ部[S].北京:化學工業出版社,2005:59.