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          腫瘤轉移論文：腫瘤轉移靶點探究
          
						
						
						
						
						
          
						
						
					
          					
					 
           
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          腫瘤轉移論文：腫瘤轉移靶點探究
           
          本文作者：范方田1,2沈存思1裴昌松3張蕾1鄭仕中1,4王愛云1,4陸茵1,4作者單位：1南京中醫藥大學藥學院2合肥職業技術學院生物系3徐州醫學院第二附屬醫院泌尿外科4江蘇省中藥藥效與安全性評價重點實驗室
           
          乳動物中HOTAIR的序列和進化特征
           
          1編碼人HOTAIR基因外顯子序列
           
          最新研究[20,21]表明，編碼HOTAIR基因的DNA序列位于12號染色體的HOXC11基因與HOXC12基因之間。分子克隆和Northern印跡法證實，HOTAIR是長度為2158nt、迭接的多聚核核苷酸轉錄產物，RT-PCR研究證實編碼HTOAIR的DNA鏈中只有一條可以被轉錄，而且與HOXC基因不在同一條DNA鏈上。編碼HOTAIR的序列中包括5個短外顯子和1個長外顯子（圖1）。Rinn等[5]應用TilingArray和RT-PCR對人體11處成纖維細胞進行的研究得出了HOTAIR傾向于在人體的后部和末端表達的相同結論，與HOX基因的表達一致，由此提示HOTAIR的表達調控與HOX基因的表達調控一致。至于HOTAIR的轉錄的調控機制，目前尚不清楚，仍有待進一步研究。
           
          2哺乳動物HOTAIR基因外顯子序列
           
          lncRNAs常被認為是一類有著不同序列卻能維持保守結構的分子。He等[20]對10種哺乳動物（人、黑猩猩、恒河猴、大猩猩、狗、牛、馬、海豚、小鼠和大鼠）和3種非哺乳脊椎動物（鴨嘴獸、雞和斑馬魚）進行了HOTAIR基因序列的比對研究，結果發現這些動物的HOTAIR基因序列存在明顯差異，除靈長類動物外，其余脊柱動物HOTAIR基因外顯子均存在明顯差異，說明種屬間HOTAIR基因存在較大差異，同源HOTAIR基因外顯子的保守性也較差；進一步的研究發現，只有在哺乳動物的HOXC11基因和HOXC12基因之間同時存在6個HOTAIR基因的外顯子[21]，而有趣的是單個HOTAIR基因外顯子普遍存在于哺乳和非哺乳脊椎動物的基因組中（圖1），由此提示HOTAIR的作用對哺乳動物非常重要；He等[20]還對13種動物HOTAIR的進化動力學進行了研究，發現同源HOTAIR基因外顯子表現出不同的進化動力學過程，例如外顯子3、4和5進化過程比較緩慢，相對比較保守，而外顯子1和2則進化速度比較快；另外，哺乳動物中HOTAIR基因序列的進化過程明顯快于鄰近的HOXC基因。以上研究結果提示，HOTAIR可能是一個比較新的基因，其中的某些外顯子正處于快速的進化過程中。
           
          HOTAIR的功能
           
          細胞完全分化后，大部分基因處于沉默狀態，這種沉默主要是由多梳蛋白和lncRNAs介導的組蛋白甲基化，而不是由海量的負性轉錄因子決定的[22]。近年來的研究表明，lncRNAs能通過染色體修飾的模式來調控相關基因的表達。一般認為，lncRNAs通過染色體修飾復合物來發揮作用，但是尚不十分清楚該功能的分子作用機制[7,22-24]。多梳抑制復合體和組蛋白去甲基化酶復合體[賴氨酸特異性去甲基化酶1/RE1-沉默轉錄因子共阻抑蛋白/REST]被認為對多數基因的轉錄調控起著重要的作用，兩者通過組蛋白甲基化和去甲基化來調控基因的轉錄過程，但一直不清楚兩者靶向目的基因的機制。HOTAIR是第一個被發現的通過反式作用調節基因表達的lncRNA，有報道稱其能通過召集PRC2和LSD1來沉默HOXD基因座的轉錄[5,25,26]?；诖耍琓sai等[27]對HOTAIR、PRC2和LSD1這三者的相互關系進行了研究，結果表明包皮成纖維細胞中的HOTAIR5’端結構域能與PRC2復合體結合，而3’端結構域能與LSD1/REST/CoREST復合體結合。HOTAIR基因敲除和過表達研究的結果表明，HOTAIR對PRC2和LSD1的相互作用是必需的。Tsai等[27]進一步通過染色質免疫共沉淀（chromatinimmunoprecipitation，ChIP）的方法，對HOX基因座和人的全基因組啟動子區PRC2和LSD1的占據情況進行了分析，結果發現HOTAIR基因敲除后HOXD基因座的轉錄明顯上調，并且伴隨組蛋白H3第4位賴氨酸二甲基化表達的上調以及組蛋白H3第27位賴氨酸三甲基化、LSD1和PRC2的表達下調。在全基因組的啟動子中有721個啟動子同時結合LSD1和PRC2，當HOTAIR同時結合這2個復合體時，可特異性介導靶向富含GC的基因位點。Tsai等[27]的研究還證實，HOTAIR能作為PRC2和LSD1這2個復合體的支架，介導這2種復合物至特異性的基因組位點，使該處染色體上的組蛋白H3K27發生三甲基化和組蛋白H3K4去甲基化，從而使染色體處于封閉狀態而使其基因沉默。值得注意的是，LSD1和PRC2調控的靶基因極為廣泛，因此改變HOTAIR的表達水平有可能導致極其復雜的生物學效應。
           
          HOTAIR與腫瘤的關系
           
          1HOTAIR與乳腺癌
           
          Gupta等[28]對HOTAIR與乳腺癌轉移的相關性進行了系統研究。臨床研究表明，HOTAIR在乳腺癌原發灶和轉移灶組織標本中的表達均升高；定量PCR檢測結果顯示，轉移灶中HOTAIR的表達水平高出正常上皮組織含量的200～2000倍，提示HOTAIR對乳腺癌的預測具有重要意義。臨床回顧性研究表明，HOTAIR在原發灶中的表達水平是預測腫瘤轉移和患者死亡的重要指標，且預測結果獨立于臨床已知的危險因素（如腫瘤大小、分期和雌激素受體的陰性或陽性表達等），提示HOTAIR作為乳腺癌轉移的指標能夠彌補現有預測指標的不足，并能形成互補，豐富乳腺癌的診斷指標。另外，基于HOTAIR在乳腺癌轉移灶中高表達的特點，可以考慮將其作為乳腺癌轉移的特異性指標。Gupta等[28]對HOTAIR在乳腺癌轉移中的作用也進行了系統研究，結果表明體外上調HOTAIR表達水平能夠促進4種乳腺癌細胞的侵襲能力；相反，沉默內源性HOTAIR的表達，即能抑制腫瘤細胞的侵襲力，提示HOTAIR的高表達可能是導致部分乳腺癌轉移的重要原因。進一步的體內研究表明，靜脈注射高表達HOTAIR的MDA-MB-231細胞，可使肺轉移率較對照親本MDA-MB-231細胞的高出10倍，可能與HOTAIR高表達導致無轉移活性的SK-BR3細胞向肺臟大量轉移有關，進一步證實了乳腺癌轉移與HOTAIR緊密相關。為了探討HOTAIR介導乳腺癌轉移的機制，Gupta等[28]通過ChIP實驗對人類全基因組啟動子區PRC2占據情況進行了分析，結果顯示高表達HOTAIR誘導H3K27me3和PRC2占據了854個基因（其中包括乳腺癌抑制基因，如HOXD10、PRG1、JAM2和EPHA1等），從而抑制了這些基因的表達（圖2）。研究還發現，腫瘤侵襲力提高依賴于HOTAIR和PRC2之間的協同作用。依據上述研究結果，一方面HOTAIR可以作為乳腺癌轉移和預后的特異性指標，在某些情況下甚至還可以作為是否進行預防性放療和化療的指標；另一方面可以針對這一靶點開發針對特定表型腫瘤的藥物。
           
          2HOTAIR與肝癌
           
          鑒于HOTAIR在乳腺癌轉移中的重要作用，Yang等[29]對HOTAIR與肝癌轉移之間的關系進行了研究。臨床研究表明，隨機抽取的50例肝癌組織的定量PCR檢測結果顯示，HOTAIR在64%的原發灶中呈現高表達，并且原發灶中的HOTAIR表達水平與肝癌轉移患者的復發率和預后緊密相關，這些足以提示HOTAIR在肝癌的轉移和復發預測中具有重要的意義。基于以上臨床研究的結果，Yang等[29]進一步開展了體外實驗，發現4種肝癌細胞株（SMMC-7721、HepG2、Bel-7402和HCCLM3）中的HOTAIR均呈現高表達，而改變HOTAIR的表達水平可明顯影響HepG2細胞的活力和細胞凋亡，下調HOTAIR的表達水平可明顯提高HepG2細胞對化療藥物順鉑和多柔比星的敏感性，這表明肝癌對鉑類制劑和多柔比星的耐藥性與HOTAIR具有相關性，但其具體的作用機制還有待進一步研究。該實驗還表明，HOTAIR表達水平與HepG2細胞的轉移能力呈正相關。HOTAIR與肝癌的研究，一方面揭示了HOTAIR與肝癌轉移和復發之間的關系，另一方面是發現了HOTAIR還可以介導腫瘤的耐藥，由此為臨床解決順鉑和多柔比星的耐藥問題提供了新的研究方向。
           
          3HOTAIR與結腸癌
           
          Kogo等[30]對結腸癌預后與HOTAIR之間的關系也進行了類似的研究，同樣發現結腸癌組織中HOTAIR的表達水平與結腸癌術后的預后呈正相關，且與肝轉移具有良好的相關性。相關作用機制的研究同樣表明，結腸癌高表達HOTAIR可以促使PCR2靶向于基因組中的相關基因，并使這些基因沉默；高表達HOTAIR的結腸癌HCT116細胞的轉移能力增強，而沉默HOTAIR的表達會降低SW480細胞的侵襲能力。最近，Niinuma等[31]的研究也發現，HOTAIR同樣會影響胃腸間質瘤的轉移和侵襲能力，說明HOTAIR不僅與上皮來源腫瘤的轉移和侵襲能力相關，而且與間質瘤的轉移也相關。這項研究拓寬了HOTAIR介導腫瘤轉移的范圍，提示HOTAIR在調控腫瘤的轉移中具有普遍意義。
           
          結語和展望
           
          隨著人們對lncRNAs在哺乳動物進化以及疾病發生和發展中的作用日益關注，lncRNAs的作用機制已成為現代遺傳學研究的熱點問題。一般認為，lncRNAs通過染色體修飾復合物來發揮作用，PRC2是一種重要的基因抑制性復合物。以往的研究表明，PRC2的亞型EZH2在多種腫瘤中表達異常，且與多個腫瘤抑制基因的沉默相關。在開展HOTAIR研究之前，一直未闡明這種抑制性復合物靶向于特定基因的分子機制。針對HOTAIR的研究，一方面闡明了lncRNAs調控基因表達的分子機制，為lncRNAs其他功能的研究提供了參考思路[26,32]；另一方面也揭示了HOTAIR與相關腫瘤之間的關系，為相關腫瘤提供了潛在的預測指標和新的治療靶點[11]。當然，目前對HOTAIR的研究尚不全面，例如尚不清楚HOTAIR的來源，也未明確導致HOTAIR異常表達的轉錄因素或突變情況，以及HOTAI的轉錄是否受其他表觀遺傳學因素調控等。雖然已有研究表明，HOTAIR與乳腺癌、肝癌和結腸癌的轉移和復發密切相關，但其與其他類型腫瘤的相關性研究尚未見報道。另外，HOTAIR異常表達與相關腫瘤轉移和復發特點之間的關系，仍有待進一步的實驗予以證明。綜上所述，筆者認為包括HOTAIR在內的lncRNAs有望成為預測腫瘤復發的新指標以及治療的新靶點。